細胞轉染是將外源性分子如DNA,RNA等導入真核細胞內的專(zhuān)門(mén)技術(shù),是研究基因表達調控,突變分析,基因沉默,蛋白質(zhì)等的工具,目前已成為生物和醫學(xué)等研究實(shí)驗室廣泛使用的基本技術(shù)。理想的轉染方法具有轉染效率高,對細胞毒性小,使用簡(jiǎn)便,適用范圍廣等特點(diǎn)。
陽(yáng)離子脂質(zhì)體法是目前普遍應用的細胞轉染方法,轉染效率較高,對細胞有一定毒性,轉染效果隨細胞類(lèi)型變化大。對于難以轉染的細胞及原代細胞,病毒介導法是可供選擇的方法之一,它通過(guò)侵染宿主細胞實(shí)現轉染,可獲得較高的轉染率。但此方法操作較費力,最適于轉染單個(gè)克隆的高表達的基因,很多類(lèi)型的病毒可裂解細胞,要考慮安全因素等。這使得新一代的轉染方法-磁性轉染,在轉染難以轉染的細胞及原代細胞時(shí),成為一個(gè)新的選擇。
用于磁性轉染的試劑MagnetofectionTM 被Nature, Cell, PNAS, JBC等很多國際知名雜志發(fā)表的文章引用,是一款被多個(gè)世界優(yōu)秀實(shí)驗室成功使用的成熟的產(chǎn)品。北京啟維益成科技有限公司代理的德國Chemicell公司生產(chǎn)的MagnetofectionTM 系列的磁性轉染產(chǎn)品和試劑,受到越來(lái)越多的國內客戶(hù)的認可。磁性轉染與其他轉染方法可以兼容,Chemicell生產(chǎn)的磁性轉染試劑CombiMAG可以和任何其他轉染方法共同使用,進(jìn)一步提高轉染率。PolyMAG可以作為唯一的轉染試劑使用。MagnetofectionTM 為何吸引了如此眾多的關(guān)注呢?
MagnetofectionTM 基于一種新穎、簡(jiǎn)單且高效的轉染培養細胞的方法。它利用磁力將與磁性納米顆粒結合的基因載體吸向,甚至可能吸入靶細胞。磁性納米顆粒由表面包被帶陽(yáng)離子的分子的完全可以生物降解的氧化鐵制成,能通過(guò)鹽誘導膠體凝聚和靜電作用與核酸和病毒等基因載體結合。加入的載體在幾分鐘之內即在細胞表面富集,使得100%的細胞與顯著(zhù)劑量的載體接觸。 結合的基因載體隨后通過(guò)胞吞和胞飲進(jìn)入細胞內,不會(huì )在細胞膜上造成穿孔而導致細胞死亡。 按照建議的濃度使用磁性納米顆粒,進(jìn)入細胞的磁性納米顆粒對細胞功能沒(méi)有影響。
這具有以下優(yōu)點(diǎn):與標準轉染方法相比,極大的提高了轉染率。與標準轉染方法相比,短時(shí)間孵育即可獲得提高達幾千倍的轉基因表達。使用極低劑量的載體即可獲得高轉染率和高轉基因表達水平,節省昂貴的轉染試劑。只需極短的處理時(shí)間,細胞與基因載體孵育幾分鐘即足以獲得高轉染率,而標準方法需幾小時(shí)。
MagnetofectionTM 的使用范圍廣泛。實(shí)驗證明,MagnetofectionTM 可以成功轉染很多細胞系及難以轉染的細胞系,原代細胞等。一種試劑可用于轉染多種載體,如核酸和病毒(DNA,siRNA,寡核苷酸,腺病毒,反錄病毒等),不需要針對不同類(lèi)型的載體購買(mǎi)不同的轉染試劑。MagnetofectionTM 可用于瞬時(shí)轉染或穩定轉染。
MagnetofectionTM 的使用方法極為簡(jiǎn)單。經(jīng)過(guò)對特定細胞(或細胞系)的轉染條件進(jìn)行優(yōu)化,確定得到最佳轉染率的條件后,即可重復使用優(yōu)化好的條件轉染同一細胞(或細胞系)。要優(yōu)化的條件包括:轉染試劑與核酸或病毒的比例,核酸的量,細胞密度,孵育時(shí)間等?;臼褂梅椒ㄊ牵?用無(wú)血清無(wú)添加物的培養基或PBS緩沖液稀釋核酸或載體,然后加入MagnetofectionTM 混勻。 孵育20-30分鐘,然后將混合物加入細胞,并置于特制的專(zhuān)門(mén)用于磁性轉染的磁板上孵育10-20分鐘。
使用MagnetofectionTM 不需要很多特殊設備,只需一次性購買(mǎi)專(zhuān)門(mén)用于磁性轉染的永久磁板即可。
與其他轉染方法類(lèi)似,MagnetofectioTM 的轉染效率受多種因素的影響。 成功的轉染要求:細胞的狀況佳,如無(wú)支原體污染,解凍后傳代次數低,轉染時(shí)細胞密度適合;核酸的量適合,因為內毒素引起細胞死亡,所以同時(shí)要求核酸的純度高;轉染試劑與核酸的比例合適;在磁板上孵育的時(shí)間適中等。最佳轉染條件對于不同細胞系或細胞可能不同,需要通過(guò)優(yōu)化確定最佳條件。優(yōu)化后的條件可反復用于轉染同一細胞系或細胞。