一、國內實(shí)驗室應用試劑配制

（一）培養液

（1）RPMI1640培養液：稱(chēng)取RPMI培養基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調節 pH7.2～7.4無(wú)菌過(guò)濾凍存備用。

（2）小牛血清商品：成都生物制品廠(chǎng)。

（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重慶藥檢所）。

（4）pH調整液：5%NaHCO 3 溶液高壓滅菌（8磅15min），0.1N稀鹽酸液100ml。

（5）秋水仙素：10mg/ml無(wú)菌過(guò)濾高壓滅菌（8磅10min）。

（6）磷酸緩沖液：pH7.4。

 磷酸氫二鈉28.8g(H 2 O)、磷酸二氫鉀2.67g(無(wú)水)，溶于1000ml雙蒸水中，加肝素，終濃度為100u/ml。

（7）Giemsa染色液：

 Giemsa粉劑 1g

 甘油 66ml

在研缽中，加入少量甘油油仔細研磨然后放甘油全部加磨，60℃溫箱中保溫2h，冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時(shí)用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍，隨配隨用。

（二）固定液

（1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

（2）PBS緩沖液配制：

NaCl 16g Na 2 HPO 4 (12H 2 O) 5.65g

KCl 0.4g KH 2 PO 4 0.4g

加雙蒸水至1000ml pH7.0。

取5%胰酶（生理鹽水配制）1ml加入50ml PBS液中（最終濃度為0.025%），4℃冰箱待用。

二、 細胞培養 （Bhatl B和McGee JOD,1990）

1．完全培養基

RPMI 76.0ml

胎牛血清 20.0ml

植物凝集素 2.0ml

抗生素/抗菌素溶液（100×） 1.0ml

L-谷氨酰胺（100×） 1.0ml

2.BudR(5’-Bromo-2-deoxyuridine, 5’-溴-2-脫氧尿嘧啶)溶解10mg/ml BudR于dH 2 O中，0.2μm濾膜過(guò)濾除菌，分裝后-20℃儲存，BudR要在柔光（弱光）下操作。

3．胸腺嘧啶（Thymidine,Thd）　　按250μg/ml溶解于dH 2 O中，過(guò)濾后分裝儲存于-20℃。

4．Colcemid(Sigma) 5.0μg/ml溶于dH 2 O中，過(guò)濾后分裝儲存于-20℃。

5．KCl（0.75mol/L）　　溶解560mg于100ml dH 2 O中，新鮮配制37℃保存。

6．固定劑　　甲醇冰醋酸按3：1（V/V）混合即可，現用現配，置冰上待用。

7．缺口平移試劑盒（Amersham和BRL公司）

8．生物素7-dATP(BRL)

9.糖原（BRL）

10．RNA酶A（Sigma）

（1）儲備液

稱(chēng)取RNA酶A 1g溶于100ml醋酸鈉中，置沸水中煮10min，分裝后儲于-20℃。

（2）工作液

用儲備液按1：100稀釋。

11．20×SSC

NaCl 175g

檸檬酸三鈉 88g

dH 2 O 1000ml

固定試劑溶解后，dH 2 O定容至1000ml，調pH至7.4，高壓滅菌

12．雜交液（高深度，HMmix）

去離子甲酰胺 6.0ml

100×Denhardt’s液 1.0ml

50%硫酸葡聚糖 2.0ml

1%人或鮭精DNA ※

20×SSC

※：臨用前加入，終濃度為100～200μg/ml。

該液為高濃度雜交液， 存于4℃。

13．PBT液

BSA 5%

Triston X-100/(PBS) 0.1%

注：BSA液用前應用Whatman 3mm濾紙過(guò)濾。

14．兔抗生物素（α-生物素）單克隆抗體

用PBT液1：100稀釋。

該單抗現可從英國Dako公司購得。

15．金（10～20nm）標羊抗兔二抗

用PBT液1：50稀釋。

16．銀溶液（Janesen）

17.Hoedst 33258（Sigma）

儲備液（100×）

Hoedst染料 5mg

甲醇 10ml

工作液：用2×SSC 1：100稀釋儲備液。