熒光檢測Western Blot本來(lái)不是檢測的主流方法，因為需要用到紫外檢測儀器，不如顯色法那么方便普及。而且還有背景的問(wèn)題。不過(guò)熒光法檢測允許在同一張轉印膜上用不同顏色的熒光底物同時(shí)檢測不同的目標，所以，對于那些樣品來(lái)源極其珍貴而又需要檢測多種目標的讀者來(lái)說(shuō)，或者是2D電泳結果的免疫印跡，DyeChrome Double Western Blot Stain Kit (D21887)算是省事而值得介紹的有趣東西－－一次電泳轉膜就可以檢測多個(gè)靶標。其他人不妨當作課外讀物，科普一下。

     這個(gè)Double Western Blot Stain其實(shí)有3色熒光，包括1）HRP偶聯(lián)抗兔二抗+Amplex Gold熒光染料檢測來(lái)自兔子的一抗，不用說(shuō)，顏色自然是金黃色的了。2）是用AP偶聯(lián)抗小鼠二抗+ DDAO 檢測來(lái)自小鼠的一抗，發(fā)出的熒光是紅色的。2種熒光顏色反差很大，所以很容易區分兩種不同的檢測目標。檢測的靈敏度達到8ng的條帶，滿(mǎn)足一般的用戶(hù)需求，又不用壓片什么的，只要紫外甚至可見(jiàn)光投射儀都可以看到。為了確保這兩個(gè)二抗不會(huì )發(fā)生交叉識別，兩個(gè)抗體特別用特定的血清預處理過(guò)（cross-adsorbed），避免交叉識別，確保檢測精確。

     這還沒(méi)夠，試劑盒提供了一種普染的MDPF熒光染料，可以用于染色全蛋白。MDPF共價(jià)結合賴(lài)氨酸，即使經(jīng)過(guò)反復的免疫印跡操作也掉不下來(lái)，經(jīng)久不息的發(fā)出藍色的熒光，而且也不影響免疫識別和結合（但是就不適合質(zhì)譜分析或者Edman測序了）檢測靈敏度達到4ng的條帶。因為在電泳后才染色，染料不影響蛋白的遷移特性。

     用的時(shí)候先用MDPF染色10分鐘，注意試劑盒建議全程用塑料容器平衡膜而不要用玻璃。然后常規（生物通Western專(zhuān)輯有介紹）封閉，一抗孵育（可以2種一抗共同孵育也可以單獨孵育），再和2種二抗混合液孵育，再在含有2種底物的混合液中顯色——顯色可以根據手頭的儀器而選擇：如果檢測光源在上面則正面向上，如果檢測光源在下面則可以正面向下顯色，5—20min，通常每15分鐘看看怎么樣了。如果夠了，涼干膜即可，不要洗。用紫外燈、掃描儀或者數碼相機都可以拍照，你可以同時(shí)看到美麗的3色熒光：藍色顯示全蛋白圖像，紅色和黃色分別指示兩個(gè)不同的目標蛋白的結果——不過(guò)拍照由于要用濾光鏡所以要分3次拍后再合成了?；ㄙM如何？Invitrogen的東西，3957元還沒(méi)打折，可以做20次Mini（9x6）膠，可以同時(shí)檢測全蛋白＋2 種不同目標，你覺(jué)得怎么樣？還算良心價(jià)了吧？如果實(shí)驗有這樣的需求，該出手的就要出手啦。