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真皮內干細胞的研究

    皮膚可能也含有大量多潛能細胞。皮膚包含表皮層、真皮層及附屬器等多種結構,表面積巨大,細胞資源豐富。而且,皮膚位置表淺、易于取材。近來(lái)研究表明,真皮內同樣存在具有多向分化潛能的細胞。新生鼠真皮細胞經(jīng)誘導后,不但能向多種中胚層細胞分化,甚至在特定條件下還能向內胚層細胞如胰島細胞分化。從成年嚙齒動(dòng)物毛囊的真皮乳頭(dermal papilla,DP)結構中可獲得間充質(zhì)來(lái)源的DP細胞。實(shí)驗證實(shí),DP細胞具有多向分化能力,不但能自發(fā)分化形成肌小管、脂肪細胞、心肌細胞及神經(jīng)樣細胞,而且能在誘導條件下,向成骨細胞及脂肪細胞分化。DP的單細胞克隆也同樣具有成骨及成脂肪雙向分化能力。

 

    不僅嚙齒類(lèi)動(dòng)物的真皮細胞內存在多分化潛能細胞,人真皮組織內亦發(fā)現多種具有不同分化潛能的細胞。通過(guò)胰酶的消化,可以從人真皮內獲得一種非貼壁生長(cháng)細胞--皮膚來(lái)源的前體細胞(skin derived precursors,SKP)。SKP能在神經(jīng)干細胞相關(guān)的培養液內大量擴增、長(cháng)期傳代培養(可體外培養1年以上);SKP在體外生長(cháng)時(shí),表現為懸浮的細胞微球,表達神經(jīng)嵴細胞的標記物中間絲蛋白,但較少表達波形蛋白。SKP能夠向多種神經(jīng)細胞如神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化。

 

    不僅如此,SKP還能向部分中胚層細胞,如脂肪細胞及平滑肌細胞分化。雖然SKP在真皮內的具體分布及根本作用尚未被徹底了解,但是它所具有的多胚層(神經(jīng)外胚層及中胚層)分化及自我更新能力,均說(shuō)明其為真皮來(lái)源的成體干細胞。Bartsch等人以膠原酶消化真皮組織,得到與SKP截然不同的貼壁生長(cháng)細胞,在體外也能長(cháng)期培養,并具有成骨、成脂肪及成肌肉的三向分化能力,表現出間充質(zhì)干細胞的特征。

 

    最近的研究顯示,來(lái)源于人真皮的中間絲蛋白陰性細胞,也能貼壁生長(cháng)和長(cháng)期傳代培養。這種真皮層細胞還表達廣泛存在于間充質(zhì)細胞和中胚層來(lái)源細胞中的標記物,如波形蛋白、CDl05、CD49d、CD29、STRO-1等,不表達CD34、CDl33等造血干細胞的標記物。以傳統的骨髓基質(zhì)干細胞誘導液分別對其誘導時(shí),可出現脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞的特征:以成脂肪誘導液誘導3周后,細胞內開(kāi)始出現大量脂滴;這些脂滴未出現在未經(jīng)誘導的細胞內,說(shuō)明成脂肪作用并非自發(fā)出現。

 

    分子水平的檢測也顯示脂肪細胞特異性基因在誘導后2周即已啟動(dòng);以成骨誘導液誘導后l周,就可檢測到成骨相關(guān)基因ALPOPN的表達,并可檢測到堿性磷酸酶的合成;2周后可以檢測到成骨特異性標記物(OCN、OPN、ON)的表達,4周后出現明顯的鈣化結節。以成軟骨誘導液誘導后2周即可檢測到軟骨特異性基因Agrrecan及Ⅱ型膠原的表達,組織化學(xué)及免疫組織化學(xué)染色亦證實(shí)這些軟骨細胞標記物的存在。

 

    不僅如此,對真皮層細胞的克隆進(jìn)行研究后發(fā)現,大部分克隆細胞均能在體外長(cháng)期傳代培養,其染色體均未出現異常。對單細胞克隆(47個(gè))進(jìn)行多向誘導后,發(fā)現其中6.4%的克隆具有成骨-成軟骨-成脂肪的三向分化能力,19.2%的克隆具有雙向分化能力。這些結果表明,人真皮中存在間充質(zhì)干細胞。

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