一.試劑配制 

      無(wú)菌水ddw： 高溫滅菌； 分裝； 

      2XHBS： 280mM NaCl 

      10mM KCl 

      1.5 mM Na2HPO4 

      12 mM glucose 

      50 mM HEPES 

      Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 過(guò)濾滅菌，分裝；

      2M CaCl2： 過(guò)濾滅菌，分裝。 

二. 實(shí)驗過(guò)程： 

      1. 鋪細胞： 選擇狀態(tài)良好的293T細胞傳代， 2-3x105個(gè)細胞/35mm dish。 

      2. 20-24h后，待細胞長(cháng)至鋪滿(mǎn)瓶底約50-70%的時(shí)候，進(jìn)行轉染。下面就35mm dish為例，采用以下轉染體系： 

      ddw： 105ul 

      plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul） 

 
      2M CaCl2： 16.5ul 

      2XHBS： 125ul 

      按上述順序，往eppendorf管中依次加入上述四種試劑。

 
      先將前三者混勻， 最后加2XHBS。 

      一種方法是，加2XHBS時(shí)要逐滴加入， 吹打至微現乳白色， 立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。

      另一種方法是， 加入2XHBS后立即吹打約40下（不過(guò)這個(gè)要根據每個(gè)人的力道和吹打的頻率而定， 建議做一個(gè)梯度實(shí)驗，吹打不同的次數看哪次的轉染效率高以后就按這個(gè)次數來(lái)吹打）， 之后步驟同上， 立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。
 

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