材料和試劑

      1. 恒溫旋轉式搖床

      2. 三角燒瓶（容量為1或2L）

      3. 50ml滅菌離心管

      4. 低溫高速離心機

      5. SB培養基

      細菌培養用胰化蛋白胨     20g

      細菌培養用酵母提取物      5g

      NaCl                     0.5g

      去離子水                 950ml

      250mmol/L KCl溶液        10ml

       以5N的NaOH調節溶液的pH值至7.0，加去離子水至1L，高壓蒸氣滅菌。

      6. 20%葡萄糖溶液

      7. 1mol/L MgCl2溶液

      8. 10%甘油

操作步驟

      1. 從新鮮的LB平板培養物中挑選一個(gè)TG1克隆，接種于10m1 SB培養基中。

      2. 37℃搖床培養過(guò)夜。

      3. 取2.5ml培養物轉接于0.5L SB中，另添加10ml 20%葡萄糖和5ml 1mol/L MgCl2。

      4. 37℃培養直到OD600=0.7～0.8。

      5. 將培養物置于冰浴15min，然后4000r/min于4℃離心20min，棄上清。

      6. 將菌體重懸于1/2體積的預冷10%甘油中，4000r/min于4℃離心20min，棄上清。

      7. 重復第（6）步驟。

      8. 將菌體重懸于15ml 10%甘油，并轉移至一支50ml的離心管中。3500r/min于4℃離心15min。小心地去掉上清，得到4～5ml細菌。迅速地將其吹打重懸；

      9. 分裝成200μl或40μl 的小份，操作應在乙醇/干冰浴中進(jìn)行。貯存于-70℃。

      10. 用pUC19質(zhì)粒測試制備感受態(tài)細菌的轉化效率，應達到109cfu/μg DNA。

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