原理:
通過(guò)脂質(zhì)體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術(shù),將靶基因導入細胞,一般在轉染后48小時(shí)左右,靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實(shí)驗目的,48小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達的檢測等實(shí)驗。
應用:
觀(guān)察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時(shí)間即可進(jìn)行觀(guān)察,但效應會(huì )很快丟失)。
一般流程:
1)細胞接種:轉染實(shí)驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長(cháng)率和細胞形狀而定。進(jìn)行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋。
2)細胞轉染(脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE6等)
3)48小時(shí)以后鑒定目的基因的表達情況。
前期準備:
構建好的外源基因載體,或目的基因基本信息。
待轉染的細胞系(1×106個(gè)細胞,可傳代,倍增時(shí)間小于48小時(shí))以及細胞培養條件的說(shuō)明。
若需要檢測靶基因的表達,請提供相應抗體。
結果呈現:
構建好的瞬時(shí)轉染細胞及相關(guān)的外源基因表達分析。