概述

     腫瘤細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養基，10%血清濃度即可，在原代培養時(shí)需加入原代細胞培養的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長(cháng)。用細胞生長(cháng)因子如胰島素、氫化可的松、雌激素等等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養。，根據細胞種類(lèi)不同選用不同的促細胞生長(cháng)因子。腫瘤組織分離為腫瘤細胞原代培養的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細胞法等。

     1.組織塊法

     將取得的瘤組織去除脂肪、結締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1-2mm3 小塊，接種于培養瓶（或皿）中，37℃、5%CO2 或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養。

     2.酶消化法

     在剪碎組織，切成1-2mm3 小塊中，加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶，在37℃水浴中消化30min或更長(cháng)一些，去除消化液，用洗液洗3次，培養基洗1次后，用完全培養基懸浮，并用吸管吹打分散制成細胞懸液，計數。以（5-10）x108 個(gè)/L細胞濃度，在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中，在37℃、5%CO2 下分瓶（或皿）中培養。

     3.鉭網(wǎng)法

     在一張面積約為1cm2 的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1-2mm3 大?。?，用鑷子輕壓，使其粘于網(wǎng)上，再把鉭網(wǎng)放入培養皿中，使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸，于37℃、5%CO2 下培養，每隔2-3天換液一次，5天后可見(jiàn)有上皮細胞從網(wǎng)上移出，并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細胞。

     4.脫落細胞法

     將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結締組織，洗液洗2次后，用刀片將腫瘤組織切成細薄片，在切割的同時(shí)有許多上皮細胞脫落下來(lái)，脫落細胞經(jīng)洗滌后，加入完全培養基，便可獲得較純的上層細胞，于培養瓶（或皿）中，37℃、5%CO2 下培養，每隔2-3天換液一次，7-10天上皮細胞逐漸長(cháng)成單層。