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細胞增殖生長(cháng)方面實(shí)驗

     細胞增殖生長(cháng)力是判定細胞活力的重要指標,有多種顯示方法。

 

實(shí)驗方法原理

 

     測定細胞絕對增長(cháng)數值常用最簡(jiǎn)便的方法。


     一般過(guò)程為


     1.  接種21 孔/24 孔板細胞(如用培養瓶時(shí)則21 瓶)。


     2.  分7 組,每組3 孔(或瓶),培養一周(7 天),期間逐日檢測一組,計數。


     3.  把7 天中的細胞數值繪成圖,即為細胞生長(cháng)曲線(xiàn)。

 

實(shí)驗材料

 

     細胞

 

試劑、試劑盒

 

     胰蛋白酶

 

 儀器、耗材

 

     吸管

 

實(shí)驗步驟

 

1.  懸液制備


      取待測生長(cháng)狀態(tài)良好細胞,增長(cháng)至接近匯合時(shí),向培養瓶?jì)燃? ml升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃溫箱中消化,至細胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養液、輕吹打制備成細懸液、計數;

 

 2.  接種


      向每孔中接種等量細胞,置溫箱中培養;把培養瓶中營(yíng)養液倒入試管中并記錄下毫升量;

 

3.  計數檢測


      從次日起,即開(kāi)始檢測第一組每個(gè)孔(或瓶)中的細胞總數,用計算盤(pán)或用細胞自動(dòng)計數器計數,取3 個(gè)孔的均值,如此至第7 組結束;

 

4.  繪圖


     用座標圖紙繪成生長(cháng)曲線(xiàn)。

 

注意事項

 

     1.  計數法簡(jiǎn)便易行,但不夠精確,約有20 %~30 %的誤差。為提高準確性,每孔也應計算2~3 次,則總和每組計算總次數達6 次~12 次,均值可能更為精確。


     2.  細胞數量增加1 倍的時(shí)間稱(chēng)倍增時(shí)間,亦可從細胞生長(cháng)曲線(xiàn)中測知。

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