細胞增殖生長(cháng)力是判定細胞活力的重要指標,有多種顯示方法。
實(shí)驗方法原理
測定細胞絕對增長(cháng)數值常用最簡(jiǎn)便的方法。
一般過(guò)程為
1. 接種21 孔/24 孔板細胞(如用培養瓶時(shí)則21 瓶)。
2. 分7 組,每組3 孔(或瓶),培養一周(7 天),期間逐日檢測一組,計數。
3. 把7 天中的細胞數值繪成圖,即為細胞生長(cháng)曲線(xiàn)。
實(shí)驗材料
細胞
試劑、試劑盒
胰蛋白酶
儀器、耗材
吸管
實(shí)驗步驟
1. 懸液制備
取待測生長(cháng)狀態(tài)良好細胞,增長(cháng)至接近匯合時(shí),向培養瓶?jì)燃? ml升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃溫箱中消化,至細胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養液、輕吹打制備成細懸液、計數;
2. 接種
向每孔中接種等量細胞,置溫箱中培養;把培養瓶中營(yíng)養液倒入試管中并記錄下毫升量;
3. 計數檢測
從次日起,即開(kāi)始檢測第一組每個(gè)孔(或瓶)中的細胞總數,用計算盤(pán)或用細胞自動(dòng)計數器計數,取3 個(gè)孔的均值,如此至第7 組結束;
4. 繪圖
用座標圖紙繪成生長(cháng)曲線(xiàn)。
注意事項
1. 計數法簡(jiǎn)便易行,但不夠精確,約有20 %~30 %的誤差。為提高準確性,每孔也應計算2~3 次,則總和每組計算總次數達6 次~12 次,均值可能更為精確。
2. 細胞數量增加1 倍的時(shí)間稱(chēng)倍增時(shí)間,亦可從細胞生長(cháng)曲線(xiàn)中測知。