1.探針的標記探針為含有與蛋白特異性結合的中心盒，大約20bp。

    2.非變性電泳

 （1）制備4%非變性膠

 （2）制備樣品

 （3）電泳：預跑膠30-60min，100V，上樣，跑膠，100V，30min左右

    3.轉膜：將膠取下，放在大小相似的尼龍膜上，上下各加1層潤濕的blotting paper , 放到半干轉移裝置上,100V，380mA , 轉膜1H.

    4.紫外交聯(lián): 取出膜，在紫外交聯(lián)儀中交聯(lián)，999.9mJ，固定10min。

    5.洗膜

 （1）將封閉液和4倍洗滌液置于37-50℃溶解。

 （2）用20ml封閉液封閉尼龍膜，溫浴15min，搖船輕搖。

 （3）20ml封閉液中加入66.7ul Stabilized Streptavidin-Horseradish Peroxidase Conjugate(1:300稀釋)，配制成conjugate/blocking solution。

 （4）將膜從封閉液中取出，在conjugate/blocking solution中輕搖15min。

 （5）將4倍洗滌液用雙蒸水稀釋成1倍洗滌液。

 （6）將膜置于新的培養皿，用20ml1倍洗滌液沖洗。

 （7）用1倍洗滌液洗膜4次，每次5min，搖床輕搖。

 （8）在新培養皿中加入30ml Substrate Equilibration Buffer,將膜放入，溫浴5min，搖床輕搖。

 （9）加入6mlLuminol/Enhancer Solution 和6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于錫箔紙包好的燒杯中，搖勻，作為Substrate Working Solution。

 （10）將膜從Substrate Equilibration Buffer中取出，用濾紙盡量吸去液體，放入新的培養皿。

 （11）將Substrate Working Solution用槍慢慢加到膜上使液體盡量到達整張膜，靜置5min。

 （12）取出膜，控制膜不能干燥。

 （13）用保鮮膜將膜包好，不能有氣泡。

 （14）在暗室中，將膜放入曝光盒，用X-ray膠片壓片，曝光。