一、實(shí)驗流程   

 
二、實(shí)驗安排

     第1次   菌體超聲破壁、離心、包涵體復性、 裝離子交換柱 

     第2次   測酶活、定蛋白離子交換層析  層析樣品進(jìn)行濃縮、透析 

     第3次   濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白  裝分子篩柱   

     第4次   分子篩層析，并對收集樣品進(jìn)行測活、定蛋白等 

     第5次   對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析，并繪出分離純化表  

三、實(shí)驗操作    

     第1次：  菌體超聲破壁、離心、包涵體復性、裝離子交換柱  

     實(shí)驗順序：超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復性  

     掌握要點(diǎn)：破壁原理 

     裝離子交換柱方法 

     包涵體復性原理及方法 

     第2 次：測酶活、定蛋白、  離子交換層析分析 、 層析樣品進(jìn)行濃縮、透析

 
     實(shí)驗順序：測酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測蛋白峰→酶活曲線(xiàn)測定→收集樣品→ 濃縮 →透析 涉及單元實(shí)驗：測酶活、定蛋白、  離子交換層析、濃縮、透析 

 
     掌握要點(diǎn)：堿性磷酸單酯酶測活原理

     紫外吸收法繪蛋白濃度曲線(xiàn)方法

     離子交換層析原理及方法

     濃縮及透析常用方法 

     第3次：濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白、裝分子篩柱  

     實(shí)驗順序：濃縮透析前、后樣品測活→考馬斯亮藍法定蛋白→裝分子篩柱→平衡  

     涉及單元實(shí)驗：測活、定蛋白、裝分子篩柱  

     掌握要點(diǎn)：考馬斯亮藍法測蛋白濃度方法    裝分子篩柱方法  

     第4次：分子篩層析，并對收集樣品進(jìn)行分析  

     實(shí)驗順序：測活樣品進(jìn)行分子篩層析→紫外吸收測蛋白峰--酶活曲線(xiàn)測定→考馬斯亮藍法定蛋白  

     涉及單元實(shí)驗：破壁、離心、分子篩層析、復性 

     掌握要點(diǎn)：分子篩層析原理    對分離純化各樣品計算比活 

     第5次：對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析， 并繪出分離純化表 

     實(shí)驗順序：蛋白電泳，同時(shí)進(jìn)行數據分析 

     涉及單元實(shí)驗：蛋白電泳

     掌握要點(diǎn)：掌握蛋白電泳方法

     了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法

     繪制酶的分離純化表