背景及原理：

      細胞中存在著(zhù)能分解磷酸酯的酶，其中最主要的是磷酸酯酶。這類(lèi)酶按最適PH可分為兩類(lèi)：1.PH在9.5左右的條件下發(fā)揮作用，稱(chēng)為堿性磷酸酶；另一類(lèi)在PH5.0左右的條件下發(fā)揮作用，稱(chēng)為酸性磷酸酶。當酸性磷酸酶與其底物作用時(shí)，能水解磷酸酯使其釋放出磷酸基，磷酸基進(jìn)而與溶液中存在的鉛鹽結合形成無(wú)色的磷酸氫鉛沉淀物，當用黃色的硫酸銨作用該沉淀時(shí)可形成黃棕色或棕黑色的硫化鉛沉淀，從而確定細胞中酸性磷酸酶所處的部位。

      酸性磷酸酶廣泛分布于集體各種組織細胞內，主要存在于細胞的溶酶體內，常作為溶酶體的標志酶，此外，還存在于內質(zhì)網(wǎng)和細胞質(zhì)內。當細胞中核算和蛋白質(zhì)代謝活動(dòng)增加時(shí)，酸性磷酸酶活性增強。酸性磷酸酶還參與脂類(lèi)代謝。因此，它在疾病、免疫反應和細胞損傷與修復過(guò)程中具有一定的生物學(xué)意義。

實(shí)驗方法與步驟：

1 取20g左右小白鼠一只，每日向其腹腔注射6%淀粉肉湯1ml，連續3d。

2 在第三次注射后4和，向腹腔注射生理鹽水1ml。

3 頸椎脫臼法處死小鼠后，打開(kāi)腹腔，用注射器（不裝針頭）直接吸取腹腔液。

4 向預冷的蓋玻片上滴一滴腹腔液，立即用牙簽圖后放入小培養皿4℃冰箱中30min，使細胞自行鋪展開(kāi)。

5 冷風(fēng)吹干玻片。

6 多聚甲醛固定30min。

7 PBS沖洗。

8 向蓋玻片上滴加酸性磷酸酶工作液，37℃，30min。

9 蒸餾水洗凈，吸去多余水分。

10 放入2%硫化銨溶液中處理5min，蒸餾水洗凈。

11 封片

12 鏡檢。

13 對照實(shí)驗：將腹腔涂片置50℃溫育30min使酶滅活，再進(jìn)行6-12步同樣的實(shí)驗。

附錄

以新鮮動(dòng)物組織為材料對細胞中酸性磷酸酶的定位

實(shí)驗方法與步驟:

1 、動(dòng)物新鮮組織低溫恒冷切片，片厚6μm，冷丙酮固定10min。

2、 把切片置于酸性磷酸酶工作液中（預熱至37℃），37℃處理0.5-1h。

3 、蒸餾水洗3次，每次1min。

4 、1%冰乙酸液處理3min。

5 、蒸餾水浸洗2次，每次1min。

6、 2%硫化銨液處理3-5min。

7 、流水沖洗數分鐘，蒸餾水洗3遍。

8、 用1:30的吉姆薩染液染色15min。

9、 封片

10、 鏡檢


注意事項：

1 孵育液必須現配先用。

2 當鉛離子濃度過(guò)低時(shí)，產(chǎn)生的磷酸離子不能完全被結合而發(fā)生彌散，并可進(jìn)入細胞核，會(huì )造成染色假陽(yáng)性。

3 孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)也可能發(fā)生酶擴散和細胞核染色現象。

（本文轉載丁香園）