原位雜交可分為菌落原位雜交和組織原位雜交。菌落原位雜交是將細菌從培養平板轉移到硝酸纖維素濾膜上,然后將濾膜上的菌落裂解以釋放DNA。將DNA烘干固定于膜上,然后將濾膜上的菌落裂菌以釋放出DNA。將DNA烘干固定于膜上與32P標記的探針雜交,放射自顯影檢測菌落雜交信號,并與平板上的菌落對位。組織原位雜交簡(jiǎn)稱(chēng)原位雜交,指組織或細胞的原位雜交,它與菌落的原位雜交不同。菌落原位雜交需要裂解細菌釋放DNA,然后進(jìn)行雜交。而原位雜交是經(jīng)適當處理后,使細胞通透性增加,讓探針進(jìn)入細胞內與DNA或RNA雜交。
原位雜交技術(shù)的基本方法包括:1雜交前準備,包括取材、固定、玻片和組織的處理、如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等。2雜交。3雜交后處理。4顯示,包括放射自顯影和非放射性標記的組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)顯色。
(本文轉載丁香園)