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動(dòng)物轉基因技術(shù)的常用方法

      

       世界上已報道了多種生產(chǎn)轉基因動(dòng)物的方法,主要有4類(lèi):①融合法,包括精子融合法,微細胞介導融合等。②化學(xué)法,包括DNA―磷酸鈣沉淀法、DEAE―葡聚糖法、染色體介導法等。③物理法,包括顯微注射法、電脈沖法、細胞凍存法等。④病毒感染法,包括重組DNA病毒感染、重組RNA病毒感染等。但真正成熟并可以穩定生產(chǎn)轉基因動(dòng)物的方法只有三種,即核顯微注射DNA法、精子介導法和核移植法等基因轉移方法。
 
      (1)核顯微注射法    核顯微注射法是動(dòng)物轉基因技術(shù)中最常用的方法。它是在顯微鏡下將外源基因注射到受精卵細胞的原核內,注射的外源基因與胚胎基因組融合,然后進(jìn)行體外培養,最后移植到受體母畜子宮內發(fā)育,這樣分娩的動(dòng)物體內的每一個(gè)細胞都含有新的DNA片段。-這種方法的缺點(diǎn)是效率低、位置效應(外源基因插入位點(diǎn)隨機性)造成的表達結果的不確定性、動(dòng)物利用率低等,在反芻動(dòng)物還存在著(zhù)繁殖周期長(cháng),有較強的時(shí)間限制、需要大量的供體和受體動(dòng)物等特點(diǎn)。
 
     (2)精子介導的基因轉移    精子介導的基因轉移是把精子作適當處理后,使其具有攜帶外源基因的能力。然后,用攜帶有外源基因的精子給發(fā)情母畜授精。在母畜所生的后代中,就有一定比例的動(dòng)物是整合外源基因的轉基因動(dòng)物。同顯微注射方法相比,精子介導的基因轉移有兩個(gè)優(yōu)點(diǎn):首先是它的成本很低,只有顯微注射法成本的1/10。其次,由于它不涉及對動(dòng)物進(jìn)行處理,因此,可以用生產(chǎn)牛群或羊群進(jìn)行實(shí)驗,以保證每次實(shí)驗都能夠獲得成功。
 
     (3)核移植轉基因法    體細胞核移植是近年來(lái)新出現的一種轉基因技術(shù)。該方法是先把外源基因與供體細胞在培養基中培養,使外源基因整合到供體細胞上,然后將供體細胞細胞核移植到受體細胞――去核卵母細胞,構成重建胚,再把其移植到假孕母體,待其妊娠、分娩,便可得到轉基因的克隆動(dòng)物。(本文轉載丁香園)

 

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