真核生物染色體 DNA 的忠實(shí)復制發(fā)生在每個(gè)細胞周的 S 期。在復制叉雙向移動(dòng)的特定結構(稱(chēng)為起點(diǎn))中,復制是受高度調節的和啟動(dòng)的。許多成熟的技術(shù)已經(jīng)被應用到研究染色體復制動(dòng)力學(xué)和特征中。許多技術(shù)都能提供了一個(gè)宏觀(guān)水平的復制視角(例如基于流式細胞術(shù)、基于 2 維和凝膠電泳)。
不管怎么樣,另一種誕生于 50 年前,被稱(chēng)為 DNA 纖維分析的方法,在單個(gè) DNA 纖維水平上揭示 DNA 復制特性,具有絕對的優(yōu)勢。最初基于放射自顯影的技術(shù)現在已近被結合有鹵代胸苷類(lèi)似物的免疫熒光檢測方法所代替。
此外,該方法的衍生技術(shù)已被開(kāi)發(fā)用來(lái)分離拉伸 DNA 纖維并平鋪在光滑的表面上。本文詳細闡述了一種 DNA 分子梳技術(shù),該技術(shù)已經(jīng)成功的被應用在出芽酵母菌上,用來(lái)監測復制叉發(fā)展進(jìn)程以及起始點(diǎn)的用途。