亚洲国产一级毛片视频-无码人妻久久一区二区三区-国产一级黄色毛片视频-精品中文字幕久久久久久-亚洲精品影院综合在线观看

新浪微博
微信互動(dòng)

植物細胞的微核檢測技術(shù)

 

一、原理:
      核(micronuclei)簡(jiǎn)稱(chēng)MCN,是真核類(lèi)生物細胞中的一種異常結構,往往是細胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生的。在細胞間期,微核呈圓形或橢圓形,游離于主核之外,大小應有主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學(xué)反應性質(zhì)和主核一樣,也具合成DNA的能力。

 

     認為微核是由有絲分裂后期喪失著(zhù)絲粒的斷片產(chǎn)生的,整條染色體或幾條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細胞分裂(cell division)末期被兩個(gè)子細胞核所排斥便形成第三個(gè)核塊。  

  

     率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關(guān),這一點(diǎn)和染色體畸變的情況一樣。所以許多人認為可用簡(jiǎn)易的間期微核計數來(lái)代替繁雜的中期畸變染色體計數。由于大量新的化合物的合成,原子能應用,各種各樣工業(yè)廢物的排出,使人們很需要有一套高度靈敏,技術(shù)簡(jiǎn)單的測試系統來(lái)監視環(huán)境的變化。只有真核類(lèi)的測試系統更能直接推測誘變物質(zhì)對人類(lèi)或其它高等生物的遺傳危害,在這方面,微核測試是一種比較理想的方法。目前國內外不少部門(mén)已把“微核測試用于輻射損傷、輻射防護、化學(xué)誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥(cancer)前期診斷等各方面。

 

二、步驟:

     1、大蒜幼根的培養:提前3~5天進(jìn)行培養,將大蒜瓣剝去外邊膜質(zhì)枯皮,下端可見(jiàn)許多微微凸起的根原體,將蒜瓣架在燒杯(大小與蒜瓣適宜)口上,杯中盛滿(mǎn)清水,使蒜瓣的下部浸入水中,置溫暖處,注意每天換水,經(jīng)3~5天后,即可長(cháng)出1-2cm的嫩根。 

     2、處理根尖:陽(yáng)性檢測采用M CrO3,M NaN3,M EMS,對照用自來(lái)水處理,處理時(shí)間24h。  

     3、恢復培養:處理后的根尖用自來(lái)水浸洗3次,每次2-3min,洗凈后在水中恢復培養24h。

     4、固定:用甲醛:冰醋酸(3:1)固定液固定24h后棄去固定液,或換入70%酒精中保存。  

     5、酸解:棄去固定液,用清水漂洗2-3次,吸凈水,加入6M鹽酸,于室溫解離10min,棄去鹽酸,漂洗根尖2-3次,徹底洗凈鹽酸。

     6、染色:截下1-2mm長(cháng)的根尖,滴加石炭酸品紅染液,染色10min,加蓋玻片,壓片觀(guān)察。 

 

三、理論補充:

     1、 微核是無(wú)著(zhù)絲點(diǎn)的染色體斷片,在有絲分裂后期不能向兩極移動(dòng),所以游離于細胞質(zhì)中,在間期細胞核形成時(shí),即可在它附近看到一到幾個(gè)很小的圓形結構,直徑大約是細胞直徑的1/20-1/5,這就是微核(micronucleus)。微核是常用的遺傳毒理學(xué)指標之一,指示染色體或紡錘體的損傷。 

     2、 染色體斷裂實(shí)際上就是染色體的缺失。如果進(jìn)行染色體畸變分析,首先要做染色核型分析(包括正常和異常的)。染色體數目多,形狀小,則適于做核型分析的中間分裂相不易得到,而且核型分析時(shí)需要較好的遺傳學(xué)知識,還需要較豐富的經(jīng)驗。與之比較,微核法是一種不需特殊 試劑 及設備,快速而簡(jiǎn)便的檢測方法。

     3、 固定是借助于物理方法或化學(xué)藥劑的作用,迅速透入組織和細胞將之殺死,并且使其結構和內含物如:蛋白質(zhì),脂肪,糖類(lèi)以及核物質(zhì)與細胞器等,在形態(tài)結構上盡可能保持生活時(shí)的完整和真實(shí)狀態(tài),同時(shí)更易于染色,可以較清楚的顯現細胞在生活時(shí)不易看清的結構。

     4、 分離的作用是去除未固定的蛋白質(zhì), 同時(shí)使胞間層的果膠類(lèi)物質(zhì)解體,細胞分散而易于觀(guān)察。 (本文轉載丁香園)

 

上一篇:DNA——分子梳技術(shù)在酵母染色體復制中的應用
下一篇:基因突變的一般特性
分享到: