提純蛋白質(zhì)后,需要測定其最小抑菌濃度(MIC),有文獻提到根據MIC測得的結果計算抑菌率:
抑菌率(%)= (陽(yáng)性對照OD值—試驗OD值) / (陽(yáng)性對照OD值—陰性對照OD值 )X100
樣品的MIC與同性質(zhì)藥物和一些常用藥物的MIC進(jìn)行比較才有意義,不能單純通過(guò)自己樣品的結果就判斷出高低,并且不能只用一種細菌。要考慮用不同種類(lèi)的細菌進(jìn)行實(shí)驗,還要做質(zhì)控。根據抑菌率大小可以判斷是否具有抑菌能力。
可參考以下藥敏介紹:
諸多藥敏試驗方法中,肉湯稀釋法是標準方法,瓊脂稀釋法也可認為屬于標準方法。其他任何方法必須與標準方法比較,才能確定可靠性。其他方法之間相互比較沒(méi)有太大價(jià)值。比較須平行測定耐藥菌株和敏感菌株。耐藥菌株,被評價(jià)方法與標準方法的誤差稱(chēng)極重要誤差,不得大于3%;敏感菌株,被評價(jià)方法的誤差稱(chēng)重要誤差,不大于7%。
不同的藥敏試驗方法,針對不同藥物,可靠性不一樣。如測MRSA須高鹽條件,有的試劑盒中不加鹽,結果不準確,但這不影響腸球菌的測定結果。所以,評價(jià)一種方法,應該是有針對性地驗證一種細菌對一種藥物測定結果的可靠性。
質(zhì)量控制及其校準作用
1、紙片法藥敏試驗
用敏感菌株做質(zhì)量控制。此外,ATCC25923,ATCC25922,ATCC27853三個(gè)菌株還具備校準作用,此點(diǎn)往往被忽視。在NCCLS有關(guān)文件中,質(zhì)量控制一節的第一部分就是講方法的校準。由于培養基和操作的原因,國內大部分實(shí)驗室的藥敏試驗沒(méi)有經(jīng)過(guò)校準,試驗的準確度差異很大。校準過(guò)程中,須注意用適合的參考菌株校準相應菌類(lèi)的藥敏試驗。如葡萄球菌藥敏試驗用ATCC25923校準;腸桿菌藥敏試驗用ATCC25922校準。
2、篩選法藥敏試驗
必須用耐藥菌株做質(zhì)量控制,最好是低水平耐藥菌株。MRS篩選試驗以ATCC43300控制。萬(wàn)古霉素篩選試驗,以ATCC51299控制。
3、稀釋法藥敏試驗
對質(zhì)量控制要求較高,特別是微量稀釋法,必須做質(zhì)量控制,否則會(huì )出現較大誤差。具體方法須依照NCCLS文件的有關(guān)部分。
與不同的菌種和不同的藥物,breakpoint 是不一樣, 對于抗菌實(shí)驗和結果解釋?zhuān)煌膰矣胁煌臉藴?,目前國際上最常用的是美國CLSI的標準,差不多每年都會(huì )有更新。其次英國的BSAC標準也有人用,尤其是有些新藥在CLSI上沒(méi)有的,可以參考BSAC, 相對于CLSI, BSAC breakpoint 更低一些。