在做病毒包裝實(shí)驗過(guò)程中，一些科研工作者會(huì )遇到這樣一些問(wèn)題：用同樣一個(gè)病毒載體系統進(jìn)行病毒包裝實(shí)驗，為什么有人做的很好，次次成功，有人卻是很少做成功，穩定性又很差，不是滴度太低就是根本不出毒，從我們對不同載體系統病毒包裝的多年經(jīng)驗總結，主要以下幾個(gè)方面心得：

     第一，病毒包裝的幾個(gè)關(guān)鍵節點(diǎn)就是載體系統(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統)、細胞因素、構建重組的質(zhì)粒正確與否、包裝轉染控制(24、48 小時(shí)的細胞及熒光狀態(tài)判斷)、質(zhì)粒抽提純化情況、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會(huì )影響到是否能包裝成功)

     第二，如果有細胞培養和細胞轉染實(shí)驗的常規經(jīng)驗，細胞因素應該沒(méi)有什么問(wèn)題(細胞培養人員一定要關(guān)注，包裝或轉染感染前一定要重視細胞干凈細微污染與否、飽滿(mǎn)立體感是否好、鋪板均勻細胞密度適中否)，細胞產(chǎn)毒出毒期間過(guò)程中的活力是包裝正常和出來(lái)的病毒滴度高低的一個(gè)重要環(huán)節(正常包裝出病毒情況，慢病毒、逆轉錄病毒包裝一個(gè)細胞出一個(gè)病毒顆粒，腺病毒是1000 個(gè)，腺相關(guān)病毒是10000 個(gè))，所以實(shí)踐操作表明，病毒包裝轉染時(shí)細胞的密度要控制，使得收毒(72 小時(shí))時(shí)細胞密度在90%到95%左右。

     第三，建議使用商品化的成熟毒載體系統(不要用來(lái)路不清或基本被淘汰很少人在使用的系統)，從文獻和我們多年的實(shí)踐可以結論，這類(lèi)系統是穩定的，因而分析原因時(shí)盡量少花精力在對載體系統的驗證上，這樣會(huì )白花力氣。

     第四，至于包裝轉染時(shí)的操作控制細節及其轉染試劑因素，只要在操作時(shí)按相關(guān)使用說(shuō)明和操作步驟，應該沒(méi)有大問(wèn)題，所以也不要白花太多精力在這上面。

     第五，另一個(gè)需要重點(diǎn)關(guān)注和排查的因素就是目的基因的表達載體構建和抽提純化環(huán)節，是否構建時(shí)導致質(zhì)粒載體重組或某個(gè)部件缺失，或污染別的質(zhì)?；螂s物?中抽純化是否污染?是否抽提的是別的質(zhì)粒?要養成同時(shí)做陰性對照的習慣(是否目的基因載體和陰性對照GFP 載體是同一批，建議同一批，建議每次包裝都如此操作)，如果這個(gè)環(huán)節沒(méi)有啥問(wèn)題，在構建中出現重組和缺失、或抽提純化失敗的可能性也不大。

     第六，落實(shí)了上面那些因素，那就是最后一個(gè)原因。目的基因的大小、序列情況、該目的蛋白的功能毒性等導致無(wú)法包裝成功(實(shí)踐中，這種情況是有的，我們偶爾會(huì )遇到，可能原因是一些基因表達翻譯后對包裝細胞產(chǎn)生毒性，導致細胞狀態(tài)異常)，那么我們能做的就是換病毒包裝載體系統，嘗試其他載體系統能否包裝出來(lái)。不過(guò)這種情況出現的幾率非常低，你做上100 個(gè)基因，也可能碰不上一個(gè)。

     因而總的來(lái)說(shuō)，我們進(jìn)行病毒包裝實(shí)驗時(shí)要重視包裝材料——細胞及表達質(zhì)粒(對拿過(guò)來(lái)的細胞和載體系統要驗證，常出現包裝細胞、空表達載體質(zhì)粒就有問(wèn)題，我們要定期純化生產(chǎn)包裝細胞、空表達載體質(zhì)粒)，細胞培養時(shí)讓它“白白胖胖、活力充沛”，目的基因的表達載體構建純化良好，質(zhì)粒間比例得當，病毒包裝實(shí)驗還是能有較好的結果。