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細菌的運動(dòng)性觀(guān)察

(一)實(shí)驗原理 


     細菌是否具有鞭毛是細菌分類(lèi)鑒定的重要特征之一。采用鞭毛染色法雖能觀(guān)察到鞭毛的形態(tài)、著(zhù)生位置和數目,但此法既費時(shí)又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛,可采用懸滴法或水封片法(即壓滴法)直接在光學(xué)顯微鏡下檢查活細菌是否具有運動(dòng)能力,以此來(lái)判斷細菌是否有鞭毛。此法較快速、簡(jiǎn)便。


     懸滴法就是將菌液滴加在潔凈的蓋玻片中央,在其周邊涂上凡士林,然后將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央,即可放置在普通光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察。水封片法是將菌液滴在普通的載玻片上,然后蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀(guān)察。


     大多數球菌不生鞭毛,桿菌中有的有鞭毛有的無(wú)鞭毛,弧菌和螺菌幾乎都有鞭毛。有鞭毛的細菌在幼齡時(shí)具有較強的運動(dòng)力,衰老的細胞鞭毛易脫落,故觀(guān)察時(shí)宜選用幼齡菌體。


(二)實(shí)驗器材


     1. 活材料:培養12-16h小時(shí)的枯草桿菌(Bacillus subtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、假單胞菌(Pseudomonas sp.)。


     2. 試劑:香柏油、二甲苯、凡士林等。


     3. 器材:凹載玻片、蓋玻片、鑷子、接種環(huán)、滴管、擦鏡紙、顯微鏡。


(三)實(shí)驗方法:


     1. 制備菌液:在幼齡菌斜面上,滴加3-4mL無(wú)菌水,制成輕度混濁的菌懸液。


     2. 涂凡士林:取潔凈無(wú)油的蓋玻片1塊,在其四周涂少量的凡士林。


     3. 滴加菌液:加1滴菌液于蓋玻片的中央,并用記號筆在菌液的邊緣做一記號,以便在顯微鏡觀(guān)察時(shí),易于尋找菌液的位置。


     4. 蓋凹玻片 


     將凹玻片的凹槽對準蓋玻片中央的菌液,并輕輕地蓋在蓋玻片上,使兩者粘在一起,然后翻轉凹玻片,使菌液正好懸在凹槽的中央,再用鉛筆或火柴棒輕壓蓋玻片,使玻片四周邊緣閉合,以防菌液干燥。


     若制水封片,在載玻片上滴加一滴菌液,蓋上蓋玻片后即可置顯微鏡下觀(guān)察。


     5. 鏡檢 


     先用低倍鏡找到標記,再稍微移動(dòng)凹玻片即可找到菌滴的邊緣,然后將菌液移到視野中央換高倍鏡觀(guān)察。由于菌體是透明的,鏡檢時(shí)可適當縮小光圈或降低聚光器以增大反差,便于觀(guān)察。鏡檢時(shí)要仔細辨別是細菌的運動(dòng)還是分子運動(dòng)(即布朗運動(dòng)),前者在視野下可見(jiàn)細菌自一處游動(dòng)至他處,而后者僅在原處左右擺動(dòng)。細菌的運動(dòng)速度依菌種不同而異,應仔細觀(guān)察。


     結果:有鞭毛的枯草桿菌和假單胞菌可看到活躍的運動(dòng),而無(wú)鞭毛的金黃色葡萄球菌不運動(dòng)。


(四)注意事項


     1. 檢查細菌運動(dòng)的載玻片和蓋玻片都要潔凈無(wú)油,否則將影響細菌的運動(dòng)。


     2. 制水封片時(shí)菌液不可加得太多,過(guò)多的菌液會(huì )在蓋玻片下流動(dòng),因而在視野內只見(jiàn)大量的細菌朝一個(gè)方向運動(dòng),從而影響了對細菌正常運動(dòng)的觀(guān)察。


     3. 若使用油鏡觀(guān)察,應在蓋玻片上加香柏油一滴。

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