80年代的技術(shù)很經(jīng)典，但那時(shí)分子生物學(xué)不夠發(fā)達，現在方法有無(wú)進(jìn)步呢?如何利用現在的技術(shù)來(lái)鑒定全新的病毒呢?有此想法很久了，可一直未搞清楚。這也跟如何發(fā)現一個(gè)新基因的道理是相通的。這是真正創(chuàng )新的基礎。

網(wǎng)友alishang：我先來(lái)最簡(jiǎn)單的：      

      1、采集各種病料，用各種細胞、宿主盲傳，分離病毒，期望看到細胞病變。如果連細胞病變都沒(méi)有，沒(méi)折了？有別的辦法證明有病毒嗎？。      

      2、純化病毒，做電鏡觀(guān)察，與已有病毒形態(tài)、大小相似好辦，要是完全不一樣呢？？？如尼帕病毒和SARS，電鏡看的出來(lái)。大家有看到發(fā)現新病毒的文獻報道嗎？      

      3、可否直接抽病料中的基因組，來(lái)個(gè)大海撈針？不過(guò)怎么從中鑒定呢？      

      4、電鏡看不出形態(tài)、大小，純化病毒跑二維電泳挖蛋白點(diǎn)測序行不？好象可行哦。      我先想這么多，大家繼續啊……

網(wǎng)友mark7447：這是一個(gè)很好的題目，不過(guò)應該有很多人在考慮，我談?wù)勎业南敕ā?    

      1、能不能找一種對所有病毒都敏感的細胞，當有新的病毒出現時(shí)，可以直接培養，無(wú)論有無(wú)CPE，先拿到病毒就可以進(jìn)行下一步的工作了。      

      2、可不可以用隨機引物對生物標本進(jìn)行擴增，測序后比對序列，定出是否是新的病原。      

      3、急性期及恢復期的血液標本特別重要，一定要盡量收集多份總量的血清，進(jìn)行中和實(shí)驗等等。      

      4、應該遵循郭霍法則，進(jìn)行相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗研究。

網(wǎng)友alishang：經(jīng)詢(xún)問(wèn)，你的第二點(diǎn)在測序公司是能實(shí)現的，第一點(diǎn)幾乎是不可能完成的任務(wù)。

網(wǎng)友docxat：想知道如何鑒定，建議看看SARS的文獻吧，好多哦。

網(wǎng)友黑山大王：我是這樣做的：      

      1、純化病毒粒子，在電鏡下觀(guān)察其形態(tài)，如果病毒量大，可以制多抗 ，看看和已知的病毒有沒(méi)有免疫交叉反應。      

      2、蛋白N端測序---序列比較----PCR引物設計---PCR---測序---核酸序列比較。       Sars的鑒定，相對大家可能是最淺顯的例子，經(jīng)電鏡一看，心中就能有所判定(冠狀)，能抓住方向。如果是一個(gè)全新的病毒，在形態(tài)上不能歸類(lèi)，只知道大小，如何往下做呢?

網(wǎng)友alishang說(shuō)：鑒定一個(gè)全新的病毒，我想，要證明以下方面:      

      1、不是已有的病毒;      

      2、是新的      

      3、有什么特性      

      4、下結論，是什么病毒      根據80年代的文獻，這些是能實(shí)現的。關(guān)鍵是如何利用現有的技術(shù)?現有技術(shù)在解決這個(gè)問(wèn)題上有無(wú)進(jìn)步??

網(wǎng)友nylli的觀(guān)點(diǎn)是：如前面的人所述，臨床經(jīng)驗是相當重要的，還有組織病理知識等等一些基礎也是必不可少的。關(guān)鍵是做出判斷是否為新的病毒。

RISC網(wǎng)友的觀(guān)點(diǎn)是：      

      1、目前分離鑒定一種新型病毒確實(shí)很難，不只有技術(shù)上的限制，還有學(xué)術(shù)權威等潛在的影響。      

      2、重視臨床信息（體征、臨床標本及輔助檢查結果以及預后等等）與實(shí)驗室工作的結合。有效的臨床信息可以幫助縮小范圍，為實(shí)驗室工作的研究方案提供指導。      

      3、傳統的病毒盲傳分離培養方法還是非常有效的，不能小看。目前還是作為一個(gè)金標準。      

      4、借助分子生物學(xué)手段從核酸入手，比如可以根據目前已知的各個(gè)種屬的病毒的保守區PCR引物，建立一個(gè)通用PCR引物庫，將來(lái)有了高通量的技術(shù)平臺時(shí)可以借助引物庫進(jìn)行快速鑒定。當然這也只是一個(gè)設想。      

      5、蛋白水平的研究，比如2D電泳等將來(lái)達到一個(gè)比較成熟的技術(shù)平臺，可以有效的進(jìn)行病毒與宿主蛋白差異表達的研究，作為研究新型病毒的信息。      一點(diǎn)拙見(jiàn)，請大家批評指正。

kinky網(wǎng)友的觀(guān)點(diǎn)是：據說(shuō)通過(guò)純化病毒，做電鏡觀(guān)察其形態(tài)幾乎是不可能的。因為病毒顆粒太小，要找到一個(gè)合適的視野特別難，所以這個(gè)方法是書(shū)本上說(shuō)起來(lái)容易，實(shí)際操作起來(lái)難度很大。

freecell網(wǎng)友說(shuō)：我的意見(jiàn)和RISC的差不多。新病毒的鑒定是個(gè)貫穿多學(xué)科的過(guò)程。      

      第一：是重視臨床鑒別診斷。例如2003年的SARS發(fā)現，就是通過(guò)與常見(jiàn)呼吸道病毒或其它病原微生物的癥狀進(jìn)行鑒別，從而得到部分線(xiàn)索；      

      第二：是血清學(xué)檢驗方法的運用。利用抗原捕捉ELISA，篩選和排除可疑病原體；采用雙份血清IgG、IgM進(jìn)行檢測，分析抗體產(chǎn)生規律，摸清感染進(jìn)程；      

      第三：是經(jīng)典病毒學(xué)方法的運用。接種細胞，產(chǎn)生CPE。但是HCV的細胞模型直到去年才建立起來(lái)。一般認為，在電鏡下觀(guān)察到病毒顆粒，是病毒鑒定的金標準；      

      第四：是運用分子生物學(xué)方法，分別進(jìn)行擴增，排除可疑病原體。在得到序列的情況下，進(jìn)行BLAST，得到病毒的大致分類(lèi)位置；      

      第五：當然是功能基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)方法了，例如基因芯片、2D等。有趣的是，輪狀病毒不同型的鑒別，是通過(guò)SDS-PAGE實(shí)現的，而且至今尚在應用；      值得一提的是，上述方法并非截然分開(kāi)的，需要進(jìn)行綜合運用。鑒定一個(gè)全新的病毒，需要扎實(shí)的理論、豐富的經(jīng)驗、睿智的實(shí)驗設計、大膽的推測演繹。

天行者007網(wǎng)友說(shuō)：我們是按照以下步驟進(jìn)行的（我們是做水產(chǎn)病毒鑒定與檢測的）       

      1、采集病料，分離細菌的有無(wú)，如沒(méi)有細菌，進(jìn)行電鏡觀(guān)察，根據病毒的形態(tài)初步鑒定      

      2、利用可能敏感的細胞、分離病毒，觀(guān)察細胞病變，電鏡觀(guān)察。      

      3、利用宿主（魚(yú)類(lèi)）進(jìn)行病毒的回歸感染試驗，觀(guān)察病魚(yú)的病癥，同時(shí)進(jìn)行電鏡觀(guān)察。      

      4、純化病毒，做電鏡觀(guān)察。      

      5、直接抽病毒的基因組（分清是DNA還是RNA病毒），根據目前已知的各個(gè)種屬的病毒的保守區PCR引物進(jìn)行初步的PCR。      

      6、進(jìn)行病毒的基因組的酶切分析，同時(shí)采用AFLP分析（DNA病毒），切膠測核酸序列，進(jìn)行Blast 比對（我們的結果就出來(lái)了）      

      7、純化病毒后進(jìn)行一維、二維電泳挖蛋白點(diǎn)測序，應該可行，但是我們沒(méi)有做

tgzhaoyujun網(wǎng)友的觀(guān)點(diǎn)是：個(gè)人認為要確定是否是新的病毒，在出現病變或相應的生理反應或影響理論上應該出現的結果時(shí)，并且病原是濾過(guò)性的，可以懷疑是新病毒，不能純化出病毒或在電鏡下看到或出現CPE，不能否認病毒的存在。涓涓細流而成江河，遇到的人多了，總會(huì )出現轉機的。

whw3791網(wǎng)友說(shuō)：這是一個(gè)很有意思的話(huà)題，病毒首先得能通過(guò)濾膜，一般情況下最好有宿主的細胞株，有的病毒如馬立克病毒是細胞毒，脫離細胞就不能生存，而有的病毒是很活潑的!病毒的確定要有豐富的臨床經(jīng)驗!

oheart_ren網(wǎng)友的觀(guān)點(diǎn)是：做病毒的，以下是我們的經(jīng)典途徑:tissue culture(CPE)-----EM observe(電鏡)------serology test------histology，pathological character----molecular detection-----animal experiment

xiangtian2004網(wǎng)友的觀(guān)點(diǎn)是：有的時(shí)候病毒未必能夠培養成功，所以基因組應該是必須的?，F在的微生物基因組學(xué)可以提供很多的有用的相關(guān)的信息，比如分析比對尋找相近的譜系?，F在的病毒的基因文庫也應該逐漸的完善豐富的，看過(guò)聞?dòng)衩防蠋?001年的有關(guān)微生物基因組學(xué)國際大會(huì )的相關(guān)的許多述評，主要講的微生物是細菌。最近幾年的有關(guān)國際微生物基因組學(xué)的大會(huì )的文章還沒(méi)有見(jiàn)到，沒(méi)有來(lái)得及去搜索，不知目前的進(jìn)展如何？

      （本文轉載：丁香通）