我們培養雙歧桿菌是在厭氧培養箱中進(jìn)行培養，如果沒(méi)有的話(huà)，用厭氧瓶或厭氧缸都可以。培養基你用的是怎么改良的呢?我們是在MRS里面加入了L-半胱氨酸,不過(guò)這都是培養用的培養基,如果你需要區分菌落可以用X-GAL改良MRS可以起到鑒別做用，具體文獻名稱(chēng)為<混合制劑中快速計數雙歧桿菌鑒別培養基的研究>

      雙歧桿菌的最適生長(cháng)溫度37℃~41℃，最低生長(cháng)溫度25℃~28℃，最高43℃~45℃。初始最適pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生長(cháng)。其細胞呈現多樣形態(tài)，有短桿較規則形、纖細桿狀具有尖細末端形、球形、長(cháng)桿彎曲形、分枝或分叉形、棍棒狀或匙形。單個(gè)或鏈狀、V形、柵欄狀排列，或聚集成星狀。革蘭氏陽(yáng)性，不抗酸，不形成芽孢，不運動(dòng)。雙歧桿菌的菌落光滑、凸圓、邊緣完整、乳脂至白色、閃光并具有柔軟的質(zhì)地。雙歧桿菌是人體內的正常生理性細菌，定殖于腸道內，是腸道的優(yōu)勢菌群，占嬰兒消化道菌叢的92%。該菌與人體終生相伴，其數量的多少與人體健康密切相關(guān)，是目前公認的一類(lèi)對機體健康有促進(jìn)作用的代表性有益菌。該菌可以在腸粘膜表面形成一個(gè)生理性屏障，從而抵御傷寒沙門(mén)氏菌、致瀉性大腸桿菌，痢疾致賀氏菌等病原菌的侵襲，保持機體腸道內正常的微生態(tài)平衡；能激活巨噬細胞的活性，增強機體細胞的免疫力；能合成B族維生素、煙酸和葉酸等多種維生素；能控制內毒素血癥和防治便秘，預防貧血和佝僂??；可降低亞硝胺等致癌物前體的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羥自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化，具有抗衰老功能。

      雙歧桿菌的培養方法很多，如厭氧箱法、厭氧袋法、厭氧罐法。這些方法都需要特定的除氧措施，操作步驟多，較繁瑣。本實(shí)驗介紹的是一種簡(jiǎn)便的試管培養法——亨蓋特厭氧滾管技術(shù)，亨蓋特厭氧滾管技術(shù)是美國微生物學(xué)家亨蓋特于1950年首次提出并應用于瘤胃厭氧微生物研究的一種厭氧培養技術(shù)。以后這項技術(shù)又經(jīng)歷了幾十年的不斷改進(jìn)，從而使亨蓋特厭氧技術(shù)日趨完善，并逐漸發(fā)展成為研究厭氧微生物的一套完整技術(shù)，而且多年來(lái)的實(shí)踐已經(jīng)證明它是研究嚴格、專(zhuān)性厭氧菌的一種極為有效的技術(shù)。該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是：預還原培養基制好后，可隨時(shí)取用進(jìn)行試驗；任何時(shí)間觀(guān)察或檢查試管內的菌都不會(huì )干擾厭氧條件。

      目前，雙歧桿菌鑒定的方法有很多種。近年來(lái)興起的一種新的RAPD等分子生物學(xué)技術(shù)對雙歧桿菌進(jìn)行基因指紋圖譜的構建，分析不同雙歧桿菌種間存在的同源性和多態(tài)性；RAPD技術(shù)也可用于雙歧桿菌菌種鑒定及分型。一般來(lái)講，我們都應用適合鑒定所有厭氧菌的方法，主要包括雙歧桿菌特定酶的檢測、乙酸、乳酸等有機酸的測定、糖發(fā)酵試驗和其他相關(guān)指標等。

實(shí)驗用具

      高純氮氣   厭氧管    注射器   培養箱   冰塊   水浴鍋   鑷子   記號筆   MRS培養基   細菌生化微量鑒定管   酒精棉球   瓷盤(pán)   振蕩器   銅柱除氧系統   定量加樣器   恒溫水浴   載玻片   顯微鏡   恒溫培養箱   超聲波破碎儀   濾紙   層析缸   酒精燈   封口膜   厭氧罐 等。

實(shí)驗方法與步驟

（1）編號  

       取五支無(wú)菌水試管，分別用記號筆標明10-1、10-2……10-5。

（2）稀釋   

      在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品，加入裝有預還原生理鹽水的厭氧試管中，用震蕩器將其混合均勻，制成10-1稀釋液。用無(wú)菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中，制成10-2稀釋液。依此進(jìn)行10倍系列稀釋?zhuān)?0-7，制成不同樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個(gè)稀釋度進(jìn)行滾管計數。

（3）滾管分離：

       1）滾管：將無(wú)氧無(wú)菌的瓊脂培養基在沸水浴中溶化，置46-50℃恒溫的水浴中，待用，用無(wú)菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度各0 .1mL，分別注入待用的試管中，然后將其平放于盛有冰水的瓷盤(pán)中迅速滾動(dòng)，帶菌的溶化瓊脂在試管內壁會(huì )即刻形成凝固層。     

       2）分離：生成的菌落需挑取出來(lái)，鏡檢其形態(tài)及純度。如尚未獲得純培養物，需再次稀釋滾管，并再次挑取菌落，直至獲得純培養物為止。待挑取的單菌落預先在放大鏡下觀(guān)察確定，做好標記。然后將培養基試管固定于適當的支架上，打開(kāi)試管膠塞，同時(shí)迅速將氣流適當、火焰滅過(guò)菌的氮氣長(cháng)針頭插入管內。同時(shí)，另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過(guò)菌的通氣針頭。將準備好的彎頭毛細管小心插入固體培養基內，找準待挑菌落，輕輕吸取，轉移至液體試管內，加塞。37℃培養。培養24h或待培養液混濁后檢查已分離培養物的純度。

      （本文裝載：丁香通）