亚洲国产一级毛片视频-无码人妻久久一区二区三区-国产一级黄色毛片视频-精品中文字幕久久久久久-亚洲精品影院综合在线观看

新浪微博
微信互動(dòng)

細菌形態(tài)檢查法

   細菌形態(tài)學(xué)是研究細菌的一個(gè)重要方面,了解細菌的形態(tài)和結構對研究細菌的生理活動(dòng)、致病性和免疫性,以及鑒別細菌、診斷疾病和防治細菌性感染等均有重要的理論和實(shí)際意義。由于細菌個(gè)體微小,常以微米(μm)為測量單位,肉眼不能直接看到,必須借助顯微鏡放大后才能觀(guān)察。根據不同的研究目的和要求,可分別選擇普通光學(xué)顯微鏡、相差顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡和電子顯微鏡等。另外,由于細菌呈半透明狀,要想更清楚地觀(guān)察其大小和形態(tài),需要進(jìn)行染色。顯微鏡檢查有不染色標本檢查法和染色標本檢查法兩種

 

一、不染色標本檢查法

  

    不染色標本主要用于檢查活菌的動(dòng)力及運動(dòng)狀況。細菌未染色時(shí)無(wú)色透明,在顯微鏡下主要靠細菌的折光率與周?chē)h(huán)境的不同來(lái)進(jìn)行觀(guān)察。有鞭毛的細菌運動(dòng)活潑,無(wú)鞭毛的細菌則呈不規則布朗運動(dòng)。梅毒蒼白密螺旋體、鉤端螺旋體、彎曲桿菌等的活菌各有特征鮮明的形態(tài)和運動(dòng)方式,具有診斷意義。常用方法有壓滴法或懸滴法,置于普通光學(xué)顯微鏡或暗視野顯微鏡下觀(guān)察。

 

    1. 壓滴法 取菌液一滴,置于清潔載玻片中央,覆上蓋玻片,于高倍鏡下觀(guān)察。制片時(shí)菌液要適量,不可有氣泡,不可外溢。這是觀(guān)察細菌動(dòng)力的一種簡(jiǎn)便方法。

 

    2. 懸滴法 取潔凈的凹窩載玻片及蓋玻片各1塊,將凹孔四周的平面上涂上一層凡士林,取一個(gè)環(huán)菌液置蓋玻片中央,將凹窩載玻片的凹面向下,對準于蓋玻片的液滴上,然后迅速翻轉玻片,用小鑷子輕壓蓋玻片使之與凹孔邊緣粘緊。鏡下觀(guān)察時(shí)先低倍后高倍,不可壓碎蓋玻片。有動(dòng)力的細菌可見(jiàn)細菌從一處移到另一處,無(wú)動(dòng)力的細菌呈布朗運動(dòng)而無(wú)位置的改變。

 

    3. 暗視野熒光法 由于細菌微小而且半透明,不染色時(shí)在普通顯微鏡下不易看清楚,如使顯微鏡視野變暗,使菌體發(fā)亮,則更容易觀(guān)察

 

二、染色標本檢查法

 

    細菌個(gè)體微小呈半透明狀,經(jīng)染色后才能觀(guān)察的較清楚。通過(guò)對標本染色,能觀(guān)察細菌的形態(tài)、大小、排列、染色特性以及莢膜、芽孢、異染顆粒等結構,有助于細菌的初步鑒定。實(shí)驗室所用的染液都是苯的衍生物,如結晶紫、美藍、孔雀綠等,是人工合成的染料,它們帶色基團與染料分子中含有的不飽和雙鍵有關(guān),含雙鍵的部位的化學(xué)性質(zhì)極不穩定,所以容易吸收光線(xiàn)而顯色。而細菌的等電點(diǎn)比較低,一般在pH2~5之間,如果在中性、堿性或弱酸性溶液中,整個(gè)菌體帶的是負電荷,容易被堿性染料染上色,這些染料對菌體的核蛋白或細胞壁的成分有特別的親和性。常用的染色法有單染法和復染法兩種:①單染法:只用一種染料染色,可觀(guān)察細菌的形態(tài)、大小和排列情況,但不能用于細菌的鑒別。操作過(guò)程:涂片→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢。②復染法:用兩種或兩種以上的染料染色,可將細菌染成不同的顏色,除可以觀(guān)察細菌的形態(tài)外還能顯示出細菌的特殊結構,在細菌的鑒別上有一定的意義。常用的有:

 

    1. 革蘭染色法 細菌的革蘭染色是最常用的鑒別染色法,由丹麥細菌學(xué)家革蘭于1884年創(chuàng )建,根據其染色結果將細菌分為革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌。

 

    操作過(guò)程:涂片→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢。

 

    染色具體方法為:初染:用結晶紫,染色1分鐘,水洗。媒染:加碘液覆蓋1分鐘后水洗。

 

    脫色:連續滴加95%乙醇,約30秒,直到滴下的乙醇無(wú)色為止,水洗。復染:加番紅染色1分鐘,水洗。

  

    2. 芽孢染色

 

   (1)原理: 細菌的芽孢壁比營(yíng)養細胞壁厚,致密,透性差,著(zhù)色和脫色都比營(yíng)養細胞困難,故一般采用一種堿性染料并在微火上加熱,或延長(cháng)染色時(shí)間,使菌體和芽孢都染上顏色以后水洗或稀酸沖去菌體的染料,芽孢仍保留顏色,再用另一種對比鮮明的染料使菌體著(zhù)色,如此可明顯區分芽孢和營(yíng)養體結構。

 

    (2)操作:

 

     ①用枯草桿菌涂片、干燥、固定。

 

     ②在涂菌處滴加5%的孔雀綠染液,用木夾夾住玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但不沸騰5~6 min。加熱時(shí)應添加染料,以免蒸干。水洗。

 

     ③0.5%番紅復染1分鐘,水洗,烘干,鏡檢(芽孢綠色,菌體紅色)。

 

     3. 莢膜染色

 

    (1)原理: 莢膜與染料親和力低。在用簡(jiǎn)單染色法時(shí),可以辨認出來(lái)。而通過(guò)莢膜染色也可以把它和細胞區別開(kāi)來(lái)。

 

     4. 鞭毛染色法

 

   (1)原理: 細菌鞭毛直徑為10~12nm,超過(guò)了光學(xué)顯微鏡的分辨能力。所以染色時(shí),不僅要使鞭毛染色,還要使一部分染料堆積在鞭毛上,加粗鞭毛的直徑以便能觀(guān)察。鞭毛染色的方法很多,但染色成功的關(guān)鍵一是必須使用新鮮培養、活動(dòng)活潑的菌體進(jìn)行染色;二是使用絕對無(wú)油的干凈玻片,以便菌液流過(guò)玻片時(shí)能保持自然形態(tài)。細菌的運動(dòng)性,可通過(guò)懸滴法制片觀(guān)察。注意區分布朗運動(dòng)和細菌本身的運動(dòng)。

 

   (2)操作:染色液配制如下。

 

    甲液:①明礬飽和水溶液 2ml;5% 石炭酸水溶液 5ml;20%鞣酸水溶液 2ml;②堿性復紅水溶液 1ml。

 

    染色前①液與②液混合后,過(guò)濾使用。

 

    乙液:美藍0.1g,硼砂1g,蒸餾水溶解,定容至100ml。

 

    染色:將制備的涂片自然干燥后,滴加甲液染色3分鐘,細小流水洗去染液,用乙液復染0.5~1min,細小流水洗去染液,自然干燥。

 

    鏡檢:菌體呈藍色,鞭毛呈紅色。

 

    5. 抗酸染色法

 

   (1)原理:分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質(zhì)含量較高,主要是分枝菌酸,一般不易著(zhù)色,若經(jīng)加溫或延長(cháng)染色時(shí)間而著(zhù)色后能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色。這種針對分枝桿菌的特殊的染色法稱(chēng)為齊尼(Zieh-Neelsen)抗酸染色法。

 

   (2)操作:①結核病人痰涂片,干燥、固定。②滴加數滴石炭酸復紅染液,酒精燈外焰上方微微加溫至冒蒸汽時(shí),維持3~5min,勿煮沸、燒干,染液要干時(shí)隨即添加。小心水洗洗凈染液。③滴加3%鹽酸酒精數滴,脫色半分鐘至1min,水洗。④滴加堿性美蘭復染0.5~1min,水洗,晾干。⑤油鏡鏡檢:分枝桿菌呈紅色,細長(cháng)稍彎曲。而其他雜菌和細胞均呈藍色。

 

    細菌的染色尚有多種方法,如異染顆粒染色法可用于觀(guān)察細菌中的異染顆粒;Fontana鍍銀染色法可用于螺旋體的染色檢查;Giimenza染色檢查立克次體等等。

 

上一篇:治療幽門(mén)螺桿菌感染中存在的問(wèn)題
下一篇:細菌的生化鑒定法
分享到: