細菌形態(tài)學(xué)是研究細菌的一個(gè)重要方面，了解細菌的形態(tài)和結構對研究細菌的生理活動(dòng)、致病性和免疫性，以及鑒別細菌、診斷疾病和防治細菌性感染等均有重要的理論和實(shí)際意義。由于細菌個(gè)體微小，常以微米(μm)為測量單位，肉眼不能直接看到，必須借助顯微鏡放大后才能觀(guān)察。根據不同的研究目的和要求，可分別選擇普通光學(xué)顯微鏡、相差顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡和電子顯微鏡等。另外，由于細菌呈半透明狀，要想更清楚地觀(guān)察其大小和形態(tài)，需要進(jìn)行染色。顯微鏡檢查有不染色標本檢查法和染色標本檢查法兩種

一、不染色標本檢查法

    不染色標本主要用于檢查活菌的動(dòng)力及運動(dòng)狀況。細菌未染色時(shí)無(wú)色透明，在顯微鏡下主要靠細菌的折光率與周?chē)h(huán)境的不同來(lái)進(jìn)行觀(guān)察。有鞭毛的細菌運動(dòng)活潑，無(wú)鞭毛的細菌則呈不規則布朗運動(dòng)。梅毒蒼白密螺旋體、鉤端螺旋體、彎曲桿菌等的活菌各有特征鮮明的形態(tài)和運動(dòng)方式，具有診斷意義。常用方法有壓滴法或懸滴法，置于普通光學(xué)顯微鏡或暗視野顯微鏡下觀(guān)察。

    1. 壓滴法　取菌液一滴，置于清潔載玻片中央，覆上蓋玻片，于高倍鏡下觀(guān)察。制片時(shí)菌液要適量，不可有氣泡，不可外溢。這是觀(guān)察細菌動(dòng)力的一種簡(jiǎn)便方法。

    2. 懸滴法　取潔凈的凹窩載玻片及蓋玻片各1塊，將凹孔四周的平面上涂上一層凡士林，取一個(gè)環(huán)菌液置蓋玻片中央，將凹窩載玻片的凹面向下，對準于蓋玻片的液滴上，然后迅速翻轉玻片，用小鑷子輕壓蓋玻片使之與凹孔邊緣粘緊。鏡下觀(guān)察時(shí)先低倍后高倍，不可壓碎蓋玻片。有動(dòng)力的細菌可見(jiàn)細菌從一處移到另一處，無(wú)動(dòng)力的細菌呈布朗運動(dòng)而無(wú)位置的改變。

    3. 暗視野熒光法　由于細菌微小而且半透明，不染色時(shí)在普通顯微鏡下不易看清楚，如使顯微鏡視野變暗，使菌體發(fā)亮，則更容易觀(guān)察

二、染色標本檢查法

    細菌個(gè)體微小呈半透明狀，經(jīng)染色后才能觀(guān)察的較清楚。通過(guò)對標本染色，能觀(guān)察細菌的形態(tài)、大小、排列、染色特性以及莢膜、芽孢、異染顆粒等結構，有助于細菌的初步鑒定。實(shí)驗室所用的染液都是苯的衍生物，如結晶紫、美藍、孔雀綠等，是人工合成的染料，它們帶色基團與染料分子中含有的不飽和雙鍵有關(guān)，含雙鍵的部位的化學(xué)性質(zhì)極不穩定，所以容易吸收光線(xiàn)而顯色。而細菌的等電點(diǎn)比較低，一般在pH2～5之間，如果在中性、堿性或弱酸性溶液中，整個(gè)菌體帶的是負電荷，容易被堿性染料染上色，這些染料對菌體的核蛋白或細胞壁的成分有特別的親和性。常用的染色法有單染法和復染法兩種：①單染法：只用一種染料染色，可觀(guān)察細菌的形態(tài)、大小和排列情況，但不能用于細菌的鑒別。操作過(guò)程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢。②復染法：用兩種或兩種以上的染料染色，可將細菌染成不同的顏色，除可以觀(guān)察細菌的形態(tài)外還能顯示出細菌的特殊結構，在細菌的鑒別上有一定的意義。常用的有：

    1． 革蘭染色法　細菌的革蘭染色是最常用的鑒別染色法，由丹麥細菌學(xué)家革蘭于1884年創(chuàng )建，根據其染色結果將細菌分為革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌。

    操作過(guò)程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢。

    染色具體方法為：初染：用結晶紫，染色1分鐘，水洗。媒染：加碘液覆蓋1分鐘后水洗。

    脫色：連續滴加95％乙醇，約30秒，直到滴下的乙醇無(wú)色為止，水洗。復染：加番紅染色1分鐘，水洗。

    2． 芽孢染色

   （1）原理： 細菌的芽孢壁比營(yíng)養細胞壁厚，致密，透性差，著(zhù)色和脫色都比營(yíng)養細胞困難，故一般采用一種堿性染料并在微火上加熱，或延長(cháng)染色時(shí)間，使菌體和芽孢都染上顏色以后水洗或稀酸沖去菌體的染料，芽孢仍保留顏色，再用另一種對比鮮明的染料使菌體著(zhù)色，如此可明顯區分芽孢和營(yíng)養體結構。

    （2）操作：

     ①用枯草桿菌涂片、干燥、固定。

     ②在涂菌處滴加5％的孔雀綠染液，用木夾夾住玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但不沸騰5～6 min。加熱時(shí)應添加染料，以免蒸干。水洗。

     ③0.5％番紅復染1分鐘，水洗，烘干，鏡檢（芽孢綠色，菌體紅色）。

     3． 莢膜染色

    （1）原理： 莢膜與染料親和力低。在用簡(jiǎn)單染色法時(shí)，可以辨認出來(lái)。而通過(guò)莢膜染色也可以把它和細胞區別開(kāi)來(lái)。

     4． 鞭毛染色法

   （1）原理： 細菌鞭毛直徑為10~12nm，超過(guò)了光學(xué)顯微鏡的分辨能力。所以染色時(shí)，不僅要使鞭毛染色，還要使一部分染料堆積在鞭毛上，加粗鞭毛的直徑以便能觀(guān)察。鞭毛染色的方法很多，但染色成功的關(guān)鍵一是必須使用新鮮培養、活動(dòng)活潑的菌體進(jìn)行染色；二是使用絕對無(wú)油的干凈玻片，以便菌液流過(guò)玻片時(shí)能保持自然形態(tài)。細菌的運動(dòng)性，可通過(guò)懸滴法制片觀(guān)察。注意區分布朗運動(dòng)和細菌本身的運動(dòng)。

   （2）操作：染色液配制如下。

    甲液：①明礬飽和水溶液 2ml；5% 石炭酸水溶液 5ml；20%鞣酸水溶液 2ml；②堿性復紅水溶液 1ml。

    染色前①液與②液混合后，過(guò)濾使用。

    乙液：美藍0.1g，硼砂1g，蒸餾水溶解，定容至100ml。

    染色：將制備的涂片自然干燥后，滴加甲液染色3分鐘，細小流水洗去染液，用乙液復染0.5~1min，細小流水洗去染液，自然干燥。

    鏡檢：菌體呈藍色，鞭毛呈紅色。

    5． 抗酸染色法

   （1）原理：分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質(zhì)含量較高，主要是分枝菌酸，一般不易著(zhù)色，若經(jīng)加溫或延長(cháng)染色時(shí)間而著(zhù)色后能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色。這種針對分枝桿菌的特殊的染色法稱(chēng)為齊尼（Zieh-Neelsen）抗酸染色法。

   （2）操作：①結核病人痰涂片，干燥、固定。②滴加數滴石炭酸復紅染液，酒精燈外焰上方微微加溫至冒蒸汽時(shí)，維持3~5min，勿煮沸、燒干，染液要干時(shí)隨即添加。小心水洗洗凈染液。③滴加3%鹽酸酒精數滴，脫色半分鐘至1min，水洗。④滴加堿性美蘭復染0.5～1min，水洗，晾干。⑤油鏡鏡檢：分枝桿菌呈紅色，細長(cháng)稍彎曲。而其他雜菌和細胞均呈藍色。

    細菌的染色尚有多種方法，如異染顆粒染色法可用于觀(guān)察細菌中的異染顆粒；Fontana鍍銀染色法可用于螺旋體的染色檢查；Giimenza染色檢查立克次體等等。