亚洲国产一级毛片视频-无码人妻久久一区二区三区-国产一级黄色毛片视频-精品中文字幕久久久久久-亚洲精品影院综合在线观看

新浪微博
微信互動(dòng)

細菌的生化鑒定法

 

   各種微生物在代謝類(lèi)型上表現了很大的差異。由于細菌特有的單細胞原核生物特性,這種差異就表現得更加明顯。不同細菌具有不同的酶系統,故不同細菌分解、利用糖類(lèi)、脂肪類(lèi)和蛋白類(lèi)物質(zhì)的能力不同,它們對物質(zhì)的代謝譜和分解產(chǎn)物也就不同,利用這種特點(diǎn)建立細菌生化反應,在菌株的分類(lèi)鑒定中具有主要意義。

 

【實(shí)驗目的】

 

     <!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->了解細菌鑒定中常用的生理生化試驗反應原理。

 

 

     <!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->掌握測定細菌生理生化反應的技術(shù)和方法。

 

【實(shí)驗原理】

 

   各種細菌由于具有不同的酶系統,致使它們能利用不同的底物,或雖然可以利用相同的底物,卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物,因此可以利用各種生理生化反應來(lái)鑒別細菌。

 

【試劑與器材】

 

      <!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->菌種 大腸埃希氏菌(Escherichia coli)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的斜面菌種

  

      <!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->培養基 葡萄糖蛋白胨水培養基、蛋白胨水培養基、糖發(fā)酵培養基(葡萄糖、乳糖或蔗糖)

 

      <!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->試劑 40%NaOH溶液、肌酸、甲基紅試劑、吲哚試劑、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示劑。

 

      <!--[if !supportLists]-->4. <!--[endif]-->器具 超凈工作臺、恒溫培養箱、高壓滅菌鍋、試管、移液管、杜氏小套管。

  

      <!--[if !supportLists]-->5. <!--[endif]-->流程 糖發(fā)酵試驗→V-P試驗→甲基紅試驗→吲哚試驗。

  

【實(shí)驗方法與步驟】

 

     <!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->糖發(fā)酵實(shí)驗

  

   ① 試管標記 取分別裝有不同糖類(lèi)(如葡萄糖、蔗糖和乳糖等)發(fā)酵培養液的試管,根據需要培養的細菌做好標記(如大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌等和空白對照)。

  

   ② 接種培養 以無(wú)菌操作分別接種少量菌苔至以上各相應試管中,空白對照中不接種,置37℃恒溫箱中培養,分別在培養24h、48h和72h觀(guān)察結果。

 

   ③ 觀(guān)察記錄 培養后各發(fā)酵管與空白對照相比,若接種培養液保持原有顏色,其反應結果為陰性,表明該菌不能利用該種糖,記錄用“-”表示;如培養液呈黃色,反應結果為陽(yáng)性,表明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸,記錄用“+”表示。培養液中的杜氏小管內有氣泡為陽(yáng)性反應,表明該菌分解糖能產(chǎn)酸并產(chǎn)氣,記錄用“+”表示;如杜氏小管內沒(méi)有氣泡為陰性反應,記錄用“-”表示。

  

     <!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->V.P.試驗

  

   ① 標記試管 取裝有葡萄糖蛋白胨培養液的試管,根據需要將培養的細菌做好標記。

  

   ② 接種培養 以無(wú)菌操作分別接種少量菌苔至以上相應試管中,空白對照管不接種,置37℃恒溫箱中,培養24~48h。

  

   ③ 觀(guān)察記錄 取出以上試管,振蕩2min。另取5支空試管相應標記菌名,分別加入3~5ml以上對應管中的培養液,再加入40%NaOH溶液10~20滴,并加入約0.5~1mg微量肌酸,振蕩試管,以使空氣中的氧溶入,置37℃恒溫箱中保溫15~30min后,若培養液呈紅色,記錄為V.P.試驗陽(yáng)性反應(用“+”表示);若不呈紅色,記錄為V.P.試驗陰性反應(用“-”表示)。

 

   注:原試管中留下的培養液用作甲基紅試驗。

  

     <!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->甲基紅試驗(M.R.試驗)

  

   取裝有葡萄糖蛋白胨水培養液的試管,接種需培養鑒定的細菌,經(jīng)過(guò)夜培養后,加入2~3滴甲基紅指示劑,注意沿管壁加入,仔細觀(guān)察培養液上層,若培養液上層變成紅色,即為陽(yáng)性反應;若仍呈黃色,則為陰性反應,分別用“+”或“-”表示。

  

     <!--[if !supportLists]-->4. <!--[endif]-->吲哚試驗

  

   ① 試管標記   取裝有蛋白胨水培養液的試管,根據需要培養的細菌做好標記。

  

   ② 接種培養   以無(wú)菌操作分別接種少量菌苔到以上相應試管中,第5管作空白對照不接種,置37℃恒溫箱中培養24~48h。

  

   ③ 觀(guān)察記錄   在培養液中加入5~10滴吲哚試劑,使試劑浮于培養物表面,形成兩層,觀(guān)察結果:如有吲哚存在,乙醚層呈現玫瑰紅色,此為吲哚試驗陽(yáng)性反應,否則為陰性反應,陽(yáng)性用“+”、陰性用“-”表示。

 

上一篇:細菌形態(tài)檢查法
下一篇:支原體的分離培養鑒定
分享到: