溶脲脲原體(Uu)和人型支原體(Mh)是常見(jiàn)的致病性泌尿道支原體。根據支原體不同生化反應特性和對特定物質(zhì)的不同抵抗力可用于分離鑒定支原體。
【原理】標本分別接種于支原體鑒別培養液內。溶脲脲原體可產(chǎn)生脲酶,使分糖產(chǎn)氨,培養液呈堿性,指示劑由黃色變?yōu)榉奂t色。人型支原體能分解精氨酸產(chǎn)氮,使含有精氨酸肉湯培養液呈堿性而呈粉紅色。
【材料】支原體分離鑒定培養液。
【標本采集】標本采集后應立即送檢,室溫保存不超過(guò)2小時(shí),2—8℃保存不超過(guò)5小時(shí)。
男性:用男性無(wú)菌拭子插入尿道口內2—4cm處輕輕旋轉取分泌物;也可取前列腺液或精液培養。必要時(shí)也可用尿液作支原體培養,取清晨第1次尿的中段尿10—20ml,經(jīng)2000rpm離心10分鐘,取沉渣接種,但尿液支原體培養陽(yáng)性率明顯低于尿道分泌物。
女性:用擴陰器擴陰后,用女性拭子在宮頸口內1—2cm處輕輕旋轉取宮頸分泌物;也可用羊水培養。不推薦用尿液。
【培養】
1、培養管復溫取出所需要數量的培養管,復溫至室溫,作好標記。
2、接種將拭子插入培養管,旋轉并擠壓數次,使拭子中支原體滲入液體中,拭子經(jīng)滅菌處理后妥善處理;尿液沉渣、精液、羊水、前列腺液等液體標本取0.2ml接種培養液,充分混勻。
3、培養35—37℃恒溫培養24—48h小時(shí),觀(guān)察結果。
【結果】 Uu應在24小時(shí)內報告,Mh應在48小時(shí)內報告,其他結果在48小時(shí)內報告,最長(cháng)不超過(guò)72小時(shí)。培養管液體由橙色變紅色,透明清亮,無(wú)明顯渾濁,表明有Uu和(或)Mh生長(cháng),可判為陽(yáng)性;培養管液體無(wú)任何變化,可報陰性結果;培養液明顯渾濁變紅者,應判無(wú)支原體生長(cháng)。必要時(shí)可做支原體固體培養,低倍鏡下觀(guān)察有荷包蛋樣菌落生長(cháng)者為支原體陽(yáng)性。
【注意事項】
1、Uu 、Mh生長(cháng)應保持培養液透明清亮,無(wú)明顯渾濁,偶遇渾濁者不得報支原體陽(yáng)性。
<!--[if !supportLists]-->2、<!--[endif]-->Uu生長(cháng),培養液正常變色時(shí)間在24小時(shí)內,但如果標本含量少時(shí),變色時(shí)間可能超過(guò)24小時(shí)。Mh生長(cháng),培養液正常變色時(shí)間在24—48小時(shí)之內,如果標本含量較大時(shí),變色時(shí)間可能會(huì )小于24小時(shí)。
3、不能確定有無(wú)雜菌污染時(shí),可將培養液取出少許接種于血平板或通過(guò)0.45um濾膜過(guò)濾培養,根據血平板菌落生長(cháng)或過(guò)濾后培養的顏色變化來(lái)判斷雜菌污染。