【原理】 肺炎支原體快速檢測卡可檢測血清中的肺炎支原體lgM抗體?;颊叩难鍢悠贩謩e加入兩個(gè)測試孔內,當樣品沿膜擴散時(shí),分別加入3滴
人lgM堿性磷酸酶復合物、3滴洗液和2滴底物,5分鐘后觀(guān)察結果。質(zhì)控孔為質(zhì)量控制,固定有人lgM,測試孔固定有肺炎支原體抗原。陽(yáng)性反應結果為藍色,陰性結果為無(wú)色。
【材料】
1、患者血清。
2、肺炎支原體lgM檢測試劑盒,包括:
(1)檢測卡:?jiǎn)为氬a紙包裝,卡上固定有肺炎支原體抗原或人lgM(質(zhì)控孔)。
(2)陽(yáng)性質(zhì)控液(1.7ml):含有人抗肺炎支原體lgM的0.1%疊氮鈉緩沖液。
(3)陰性質(zhì)控液(1.7ml):0.1%疊氮鈉緩沖液。
(4)酶結合物:(11ml):含有以堿性磷酸酶標記的抗人lgM單克隆抗體的0.1%疊氮鈉緩沖液。
(5)洗液:9.5%(W/V)的呱基氫氯酸。
(6)底物(15ml):含有5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的0.1%疊氮鈉的緩沖液。
(7)移液管。
【樣本處理】血清樣品2—8℃可保存3天,如果不能在此期間測試,-20℃保存,樣品不宜反復凍融。
【操作】
1、從冰箱中取出試劑盒,置室溫平衡20分鐘。
2、從錫紙袋中取出檢測卡,作好標記。
3、用移液管滴加2滴血清到卡下端兩個(gè)測試孔中。
4、22—25℃下孵育2分鐘。2分鐘內血清應沿膜擴散至上端的測試孔中。
5、加入3滴酶結合物到下端兩個(gè)測試孔中,22—25℃下孵育2分鐘,酶結合物應沿膜擴散至上端的測試孔中。
6、加入3滴洗液到上端兩個(gè)測試孔中,等待完全吸收。
7、滴加2滴底物試劑到上端兩個(gè)測試孔,22—25℃下孵育5分鐘,5分鐘后立即觀(guān)察反應結果。
【結果】 根據上端兩個(gè)反應孔的反應結果判斷:
陽(yáng)性結果:上端兩孔都出現藍色。提示肺炎支原體性lgM存在。
陰性結果:質(zhì)控孔出現藍色或輕微藍色,測試孔無(wú)色或呈暗灰色,提示不存在肺炎支原體lgM或其濃度在檢測下限之下。
無(wú)效反應:質(zhì)控孔不出現藍色。產(chǎn)生無(wú)效反應的可能原因為:試劑或檢測卡質(zhì)量問(wèn)題,操作不當,樣品擴散不好,酶結合物嚴重污染,血清中含有過(guò)多脂質(zhì)成分等。無(wú)污染血清可離心后再次測試 。
【特異性】該試劑盒與下列因素不發(fā)生交叉反應:腺病毒、風(fēng)濕因子、呼吸道合胞病毒、抗核抗體、流感病毒A型和B型、副流感病毒3型、組織胞漿菌、巨細胞病毒等。