在宿主細胞過(guò)量的情況下，噬斑的數量隨著(zhù)噬菌體的增加呈線(xiàn)性增加。由于這個(gè)原因，在感染以前，要將噬菌體進(jìn)行稀釋?zhuān)皇菍⑺拗骷毎♂?。以?/span>MOI（感染重復性）鋪板，也可確保每一個(gè)噬斑僅包含一個(gè)DNA序列。

     材料和試劑 

     1. 微波爐 

     2. LB/IPTG/Xgal培養板 

     3. LB培養基 

     4. 頂層瓊脂糖凝膠 

     操作步驟 

     1. 在5~10ml LB培養基中接種單個(gè)ER2537克隆，振搖孵育直至對數生長(cháng)中期（OD600~0.5） 

     2. 在細胞生長(cháng)時(shí)，微波融化頂層瓊脂糖凝膠，分裝至無(wú)菌培養管內，每管3ml。維持在45℃備用。

 
     3. 37℃預熱LB/IPTG/Xgal培養板，備用。 

     4. 以LB培養基10倍比稀釋噬菌體。 

     建議稀釋范圍：對擴增的噬菌體培養上清，108-1011；對未擴增的篩選洗脫液，101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭，最好使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。

     5. 一旦ER2537培養物長(cháng)至對數生長(cháng)中期，分裝至微量離心管中，每管200ml。 

     6. 將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細菌培養物的微量離心管中，一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml，快速渦旋，室溫孵育1-5min。 

     7. 轉移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中，快速渦旋混勻，立即傾倒至預熱的LB/IPTG/Xgal平板上，輕緩搖動(dòng)平板使頂層膠均勻分布。 

     8. 冷卻平板5min，37℃倒置培養過(guò)夜。 

     9. 噬斑計數以噬斑數為100左右的平皿為準，噬斑數乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位（pfu）。