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表達β-半乳糖苷酶噬菌體的噬菌斑分析

   材料:

 

   LB或NZCYM頂層瓊脂或瓊脂糖,含有X-gal。對于3ml頂層瓊脂,加40μl 2%X-gal。X-gal要在臨用前才加入已冷卻的頂層瓊脂(47℃)中。

 

   大腸桿菌鋪平板細菌。只有不是β-半乳糖苷酶的過(guò)量表達株,可采用任何支持特異性λ噬菌體裂解生長(cháng)的大腸桿菌。細菌染色體上單拷貝lacZ基因的存在不影響噬菌斑的檢測。

 

   方法:

 

   1.  將λ噬菌體原種于SM+明膠液稀釋。

 

   2.  用10μl適當稀釋的λ噬菌體感染0.1ml鋪平板細菌。感染培養物37℃溫育20min。

 

   3.  用3ml含X-gal的已熔頂層瓊脂(47℃)至第一個(gè)試管,通過(guò)輕拍或輕微渦旋振蕩混勻,隨后倒入至瓊脂平板上。

 

   4.  用剩下的噬菌體原種的稀釋液重復步驟3。

 

   5.  當頂層瓊脂凝固后,將平板于37℃倒置培養15-18h。

 

   6.  將平板哦成那個(gè)37℃培養箱中取出,再于室溫下放置2h,然后記錄噬菌斑的顏色。

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