病原性真菌的檢測
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發(fā)布時(shí)間：2016-11-11
一、實(shí)驗目的
了解真菌接種、培養的一般程序；掌握單細胞真菌和多細胞真菌的菌絲、孢子的形態(tài)特點(diǎn)；掌握真菌不染色標本直接檢查方法。
二、實(shí)驗內容
（一）真菌的菌落觀(guān)察
觀(guān)察真菌菌落的形態(tài)特點(diǎn)及顏色有助于病原性真菌的鑒定。一般觀(guān)察真菌的菌落必需將真菌培養于沙保弱氏培養基（俗稱(chēng)大培養），經(jīng)數日致十數日的培養后才可看到典型菌落。
1. 材料
（1）臨床標本（可疑真菌感染）：毛發(fā)或皮屑。
（2）真菌菌種：新生隱球菌，白假絲酵母菌，絮狀表皮癬菌。
（3）沙保弱氏葡萄糖斜面培養基（含青、鏈霉素）。
（4）其它：70%酒精 、無(wú)菌生理鹽水 、平皿等。
2. 方法
（1）臨床標本用70%酒精浸泡數分鐘，殺死表面雜菌，以無(wú)菌生理鹽水洗滌。
（2）將處理過(guò)的臨床標本和實(shí)驗室保存菌種分別接種于2~3只含有青、鏈霉素的沙保弱氏葡萄糖斜面培養基上，對臨床標本直接將數根毛發(fā)或數塊皮屑接種。真菌菌種則用滅菌接種環(huán)按斜面培養基接種法接種。
（3）置22~28℃培養2~3w或37℃培養箱中培養3~7d。
（4）一周觀(guān)察1~2次，臨床標本連續培養3w無(wú)菌落生長(cháng)者可報告陰性，如長(cháng)出菌落，應逐日觀(guān)察菌落形態(tài)及顏色變化。
3. 結果觀(guān)察
真菌的菌落從形態(tài)上可分三大類(lèi)：酵母菌落、酵母樣（型）菌落及絲狀菌落。
（1）酵母菌落（觀(guān)察新生隱球菌培養物）：菌落為圓形、較白色，邊緣整齊表面光滑、濕潤，假菌絲不伸入到培養基內，和表皮葡萄球菌菌落相似。
（2）酵母樣（型）菌落（觀(guān)察白假絲酵母菌）：表面和酵母菌落相似，但生成的假菌絲伸入培養基內。
（3）絲狀菌落：觀(guān)察各種皮膚絲狀菌斜面培養物,菌落表面大都有氣生菌絲,肉眼觀(guān)察呈絨毛狀、粉狀、棉花樣等，故稱(chēng)絲狀菌落，色澤多種多樣，紅色毛菌呈紫紅色，鐵銹色毛菌呈鐵銹色或棕色等，菌落底層有營(yíng)養菌絲伸入培養基內。
（二）真菌的形態(tài)觀(guān)察
1. 菌絲的形態(tài)
（1）梳狀菌絲：菌絲一側有多數短的分枝，間距不等，形如梳子，故名梳狀菌絲常見(jiàn)于許蘭氏毛菌。
（2）螺旋狀菌絲：某些菌絲呈螺旋狀彎曲，常見(jiàn)于石膏樣小孢子菌和許蘭氏毛菌。
（3）球拍樣菌絲：在菌絲分節處一端膨大，如網(wǎng)球拍樣，常見(jiàn)于小孢子菌（microsporum）及表皮癬菌(epidermophyton)。
（4）結節狀菌絲：菌絲纏繞成結節樣，常見(jiàn)于奧杜盎小孢子菌等。
（5）鹿角狀菌絲：菌絲末端膨大成鹿角狀，多見(jiàn)于許蘭氏毛菌。
（6）假菌絲：酵母菌（如：白假絲酵母菌）的菌體細胞延長(cháng)分枝后并不脫落，形成類(lèi)似菌絲的結構。
