花粉粒有可育和不育兩種,通過(guò)一種可以指示膜的完整性的酶對花粉粒進(jìn)行染色,由于只有可育的花粉在顯微鏡下可以觀(guān)察到熒光,而不育的美譽(yù),因此可以將兩者區別。
一、材料和試劑
1. BKbufferS 15 M OPSpH7.5
2. 醋酸熒光素(FDA)
3. Source:擬南芥花粉
4. 取樣:開(kāi)花期
5. 染色:Stock醋酸熒光素(FDA)溶液2 mg FDA/mlof丙酮(在離心管中-20°C保存)。
二、設備
1. 熒光顯微鏡
三、步驟
1. 取1 ul FDA母液加入到1mloftheBKbufferS 15 M OPS,pH7.5。
注意:FDA母液非常易揮發(fā)–混合FDA-buffer時(shí)不要超過(guò)2個(gè)小時(shí)。
2. Mounting:滴一滴FDA-buffer混合液到用酒精清洗過(guò)的載玻片上,放上一些花粉粒到溶液里,蓋上蓋玻片。
3. 觀(guān)察:在藍光下(wavelength=495 nm)用光學(xué)顯微鏡觀(guān)察。有活力的花粉粒顯示熒光(FCR+)。
注意:醋酸熒光素,是無(wú)極性、無(wú)熒光的分子,穿入到花粉粒中。它被花粉的酯酶類(lèi)水解釋放熒光素,一個(gè)極性熒光分子,當花粉粒的膜是完整的,熒光素會(huì )在花粉粒的內徑積累,就會(huì )在藍光下顯示熒光。FCR檢測可以讓我們知道花粉粒酯酶的活性和膜的完整性。
(本文轉載丁香通)