細胞原代培養的目的是為研究生物體細胞的生長(cháng)、代謝、繁殖提供有力的手段，為傳代培養創(chuàng )造條件，服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。

實(shí)驗材料

      胎鼠   新生鼠

      試劑、試劑盒

      1640培養基   牛血清   胰酶   Hank’s液碘酒儀器、耗材

      培養箱   培養瓶   青霉素瓶   小玻璃漏斗   平皿吸管   移液管   紗布   手術(shù)器械   血球計數板   離心機   水浴箱

實(shí)驗步驟

      1.  加入3-5 ml培養液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。

      2.  靜置5-10分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。

      3.  1 000 rpm，離心10分鐘，棄上清液。

      4.  加入Hank’s液5 ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。

      6.  將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至25 ml細胞培養瓶中，37℃下培養。

注意事項

      1.  自取材開(kāi)始，保持所有組織細胞處于無(wú)菌條件。細胞計數可在有菌環(huán)境中進(jìn)行。

      2.  在超凈臺中，組織細胞、培養液等不能暴露過(guò)久，以免溶液蒸發(fā)。

      3.  凡在超凈臺外操作的步驟，各器皿需用蓋子或橡皮塞，以防止細菌落入。

      4.  操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。

      5.  點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(cháng)，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過(guò)營(yíng)養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。

      6.  操作動(dòng)作要準確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機會(huì )。

      7.  不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要布局合理。

      8.  瓶子開(kāi)口后要盡量保持45°斜位。

      9.  吸溶液的吸管等不能混用。

實(shí)驗方法原理

      將動(dòng)物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長(cháng)和繁殖，這一過(guò)程稱(chēng)原代培養。因此，較為嚴格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養，此時(shí)的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以?xún)鹊呐囵B細胞統稱(chēng)為原代細胞培養。最常用的原代培養有組織塊培養和分散細胞培養