培養基簡(jiǎn)介
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發(fā)布時(shí)間:2017-08-28
背景資料:
早期細胞培養多使用天然培養基,主要是生物體的各種體液,如血漿、血清、淋巴液、組織或胚胎提取液等。其優(yōu)點(diǎn)是容易得到,營(yíng)養價(jià)值高;缺點(diǎn)是成分不易控制。目前使用的是化學(xué)成分明確的合成培養基。合成培養基是模擬細胞和組織生長(cháng)所需要的營(yíng)養成分而設計的化學(xué)成分明確的培養基,目前廣泛使用。但目前多數情況下合成培養基還不能徹底替代天然培養基,兩者賞配合使用。組織培養使用的培養基一般是由合成培養基和小牛血清配制而成。
合成培養基有商品出售,它是根據細胞生長(cháng)的需要按一定配方制成的粉狀物質(zhì)。其主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機離子和其他輔助物質(zhì)。用它配制成的培養液的酸堿度和滲透壓與活體內細胞外相似。動(dòng)物細胞的培養大多數是需要輕微的堿性條件,pH為7.2~7.4;而植物細胞大多數需要酸性條件。NaHCO3用來(lái)調節pH。
培養基成分分析:
培養基含有細胞生長(cháng)所需的各種營(yíng)養成分,包括氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機離子和其他輔助物質(zhì)。
①氨基酸:合成培養基通常不含有全部合成蛋白質(zhì)所需的氨基酸,只含有必需氨基酸和較難合成的氨基酸,谷氨酰胺除用于蛋白質(zhì)合成外還具有特殊的作用。它能促進(jìn)各種氨基酸進(jìn)入細胞膜,是核酸合成的氮源,還參與ATP的合成。
②維生素:多數合成培養基添加生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素及B12等水溶性維生素,脂溶性維生素可從血清中得到補充。
③無(wú)機鹽:細胞生長(cháng)需要Na+、K+、Ca2+、Mg2+、N和P等基本元素及碳酸氫鹽、磷酸氫鹽,還需要鐵、銅和鋅等微量元素。這對維持細胞滲透壓,維持酶的活性,調節溶液的酸堿度等方面起著(zhù)重要的作用。
④碳水化合物:是細胞生命活動(dòng)的主要能量來(lái)源,主要添加D-葡萄糖,也有添加D-干露糖和D-果糖等。
⑤血清:普通的細胞培養需要在合成培養基中添加一定量的血清才能使細胞增殖,原因是血清中含有細胞生長(cháng)因子;血清還提供一些酶、維生素、微量元素和激素等;血清能中和如重金屬等有毒物質(zhì)的毒性,對細胞起到保護作用;血清可抑制胰蛋白酶的活性;血清可提供接觸和伸展因子,增加細胞對瓶皿的貼附性。用于細胞培養的血清常用牛血清。一般動(dòng)物越年輕,其血清越有利于細胞生長(cháng),故成年牛血清不如小牛血清好,小牛血清不如胎牛血清好。
⑥其他成分:包括肌醇、膽堿、膽固醇、酸堿指示劑(如酚紅)、丙酮酸鈉等。