配制步驟
(1)去離子水用蒸餾器進(jìn)行重新蒸餾(去除無(wú)機和有機雜質(zhì)),制成1000mL三蒸水。三蒸水應及時(shí)使用,如果放置一段時(shí)間,則使用前須高壓處理三蒸水(15MPa,20min)。
(2)待水溫降至15~30℃,加入合成培養基干粉,用磁力攪拌一定時(shí)間(2~4h)使之充分溶解。
(3)配制RPMI1640培養基時(shí)應通入適量CO2加入6mol/L HCI調pH至6.0左右,這樣才能充分溶解。而配制DMEM不需要此步驟。
(4)加入一定量NaHCO3調節pH至6.9左右。
(5)加水至最終體積
。
(6)打開(kāi)超凈工作臺內的紫外消毒燈20min以上。在超凈工作臺中對溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌,分裝入100mL或50mL無(wú)菌玻璃瓶中。
(7)瓶口封好,4℃冰箱儲存(RPMI1640培養液可以—20℃儲存)。
注意事項
(1)培養細胞使用的瓶子和飯盒應與提取RNA和培養細菌用的瓶子和飯盒嚴格分開(kāi)。因為用于處理提取RNA的DEPC(0.2%焦炭酸二乙酯)是一種致癌劑,并可能影響細胞生長(cháng)。而培養過(guò)細菌的用品也不應與培養細胞的混用,以免造成細菌污染。
(2)過(guò)濾時(shí)過(guò)濾泵的壓力不要太大,否則使濾膜破裂,起不到除菌的效果。分裝時(shí)需根據使用量的多少分裝于大小合適的瓶子中,分裝量為使用3~5次用完為宜,并且每瓶只能裝2/3體積的液體,過(guò)多時(shí)會(huì )影響使用或產(chǎn)生污染機會(huì )。
(3)培養液過(guò)濾后pH可提高0.2~0.3,故在過(guò)濾前調節培養液pH至6.9左右即可,過(guò)濾后達到pH7.1~7.2。