配制步驟

      （1）去離子水用蒸餾器進(jìn)行重新蒸餾（去除無(wú)機和有機雜質(zhì)），制成1000mL三蒸水。三蒸水應及時(shí)使用，如果放置一段時(shí)間，則使用前須高壓處理三蒸水（15MPa，20min）。

      （2）待水溫降至15~30℃，加入合成培養基干粉，用磁力攪拌一定時(shí)間（2~4h）使之充分溶解。

      （3）配制RPMI1640培養基時(shí)應通入適量CO2加入6mol/L HCI調pH至6.0左右，這樣才能充分溶解。而配制DMEM不需要此步驟。

      （4）加入一定量NaHCO3調節pH至6.9左右。

      （5）加水至最終體積

。

      （6）打開(kāi)超凈工作臺內的紫外消毒燈20min以上。在超凈工作臺中對溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌，分裝入100mL或50mL無(wú)菌玻璃瓶中。

      （7）瓶口封好，4℃冰箱儲存（RPMI1640培養液可以—20℃儲存）。

注意事項

      （1）培養細胞使用的瓶子和飯盒應與提取RNA和培養細菌用的瓶子和飯盒嚴格分開(kāi)。因為用于處理提取RNA的DEPC（0.2%焦炭酸二乙酯）是一種致癌劑，并可能影響細胞生長(cháng)。而培養過(guò)細菌的用品也不應與培養細胞的混用，以免造成細菌污染。

      （2）過(guò)濾時(shí)過(guò)濾泵的壓力不要太大，否則使濾膜破裂，起不到除菌的效果。分裝時(shí)需根據使用量的多少分裝于大小合適的瓶子中，分裝量為使用3~5次用完為宜，并且每瓶只能裝2/3體積的液體，過(guò)多時(shí)會(huì )影響使用或產(chǎn)生污染機會(huì )。

      （3）培養液過(guò)濾后pH可提高0.2~0.3，故在過(guò)濾前調節培養液pH至6.9左右即可，過(guò)濾后達到pH7.1~7.2。