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RbCl超級感受態(tài)細胞

一、材料與試劑


1.  SOBor2xYT

2.  MES

3.  足夠80個(gè)管子的TFB(50 mL)/400轉化DMSO

4.  5 M NaCl

二、儀器


1.  離心機

三、步驟


1.  室溫下在5 ml SOB或2×YT中接種菌并且培養過(guò)夜。


2.  加過(guò)夜培養的菌到500 ml 的SOB或2×YT,其裝在4L瓶中以最大限度的透氣。加入36 ml 5 M 的NaCl,在30℃下培養。

3.  大約3 h,OD600達到0.5。

4.  離心細胞。取沉淀,吸取多余的液體。

5.  加50 ml 冷TFB重懸細胞,冰上孵育15 min。

6.  準備干冰/乙醇?。ê穸纫恢保┗蛞旱?。

7.  當離心細胞時(shí),加入1.75 ml DMSO。(DMSO不需要滅菌)

8.  冰上孵育細胞10 min,并且在冰上冷凍離心管。

9.  每個(gè)離心管加0.5 ml 細胞,迅速將比例管放置于干冰上,細胞在-70°C可以達12個(gè)月。

10.  使用100 ul 轉化。42°C熱激1.5到2 min。


      (本文轉載丁香通)

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