一、材料與試劑
1. SOBor2xYT
2. MES
3. 足夠80個(gè)管子的TFB(50 mL)/400轉化DMSO
4. 5 M NaCl
二、儀器
1. 離心機
三、步驟
1. 室溫下在5 ml SOB或2×YT中接種菌并且培養過(guò)夜。
2. 加過(guò)夜培養的菌到500 ml 的SOB或2×YT,其裝在4L瓶中以最大限度的透氣。加入36 ml 5 M 的NaCl,在30℃下培養。
3. 大約3 h,OD600達到0.5。
4. 離心細胞。取沉淀,吸取多余的液體。
5. 加50 ml 冷TFB重懸細胞,冰上孵育15 min。
6. 準備干冰/乙醇?。ê穸纫恢保┗蛞旱?。
7. 當離心細胞時(shí),加入1.75 ml DMSO。(DMSO不需要滅菌)
8. 冰上孵育細胞10 min,并且在冰上冷凍離心管。
9. 每個(gè)離心管加0.5 ml 細胞,迅速將比例管放置于干冰上,細胞在-70°C可以達12個(gè)月。
10. 使用100 ul 轉化。42°C熱激1.5到2 min。
(本文轉載丁香通)