亚洲国产一级毛片视频-无码人妻久久一区二区三区-国产一级黄色毛片视频-精品中文字幕久久久久久-亚洲精品影院综合在线观看

新浪微博
微信互動(dòng)
首 頁(yè)

RbCl超級感受態(tài)細胞

發(fā)布人：admin 瀏覽次數：1147 發(fā)布時(shí)間：2017-09-05

一、材料與試劑


1.  SOBor2xYT

2.  MES

3.  足夠80個(gè)管子的TFB（50 mL）/400轉化DMSO

4.  5 M NaCl

二、儀器


1.  離心機

三、步驟

1.  室溫下在5 ml SOB或2×YT中接種菌并且培養過(guò)夜。


2.  加過(guò)夜培養的菌到500 ml 的SOB或2×YT，其裝在4L瓶中以最大限度的透氣。加入36 ml 5 M 的NaCl，在30℃下培養。

3.  大約3 h，OD600達到0.5。

4.  離心細胞。取沉淀，吸取多余的液體。

5.  加50 ml 冷TFB重懸細胞，冰上孵育15 min。

6.  準備干冰/乙醇?。ê穸纫恢保┗蛞旱?。

7.  當離心細胞時(shí)，加入1.75 ml DMSO。（DMSO不需要滅菌）

8.  冰上孵育細胞10 min，并且在冰上冷凍離心管。

9.  每個(gè)離心管加0.5 ml 細胞，迅速將比例管放置于干冰上，細胞在-70°C可以達12個(gè)月。

10.  使用100 ul 轉化。42°C熱激1.5到2 min。


      （本文轉載丁香通）

上一篇：培養基的配制
下一篇：基因打靶細胞系的制備及應用
分享到：