【實(shí)驗目的】

      1. 了解常規切片的制作過(guò)程。

      2. 熟悉蘇木素－伊紅(hematoxylin and eosin，HE)染色方法。

      將各種方法（活檢、尸檢）獲取的組織標本經(jīng)過(guò)一定的步驟處理，做成切片。蘇木素是堿性染料，可將細胞核（嗜堿性物質(zhì)）染成藍色，伊紅是酸性染料，可將多數細胞的細胞質(zhì)（嗜酸性物質(zhì)）染成紅色，形成色彩鮮艷、結構清晰的組織圖像。

【實(shí)驗對象】　

      尸檢來(lái)源的正常肺組織。

【實(shí)驗藥品與器材】

      1. 器材　手術(shù)刀、恒溫箱、石蠟切片機、顯微鏡。

【實(shí)驗方法與步驟】

      1. 取材和固定　用鋒銳的手術(shù)刀細致而迅速地取下一塊大小適宜(1.5×1.5×0.2 cm)的肺組織塊，立即投入10％福爾馬林內固定24 h，也可多放一段時(shí)間待用時(shí)取出（最好不要超過(guò)48h）。

      2. 脫水　依次經(jīng)過(guò)70％(2 h)、80％(2 h)、90％(2 h)、95％酒精(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)和無(wú)水酒精(Ⅰ、Ⅱ各1 h)脫水，二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各1 h)，以置換組織內的酒精溶液。

      3. 包埋　將透明好的組織塊置入已在溫箱(58℃～60℃)內熔化的石蠟內(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)，使石蠟浸入組織并替換出二甲苯。在包埋器的內壁涂一層甘油，傾入熔化的石蠟，將浸透蠟的組織塊放入包埋器（待切面朝下），擺好間距和方位，待蠟液表面凝固后，將包埋器投入冷水浴中，使石蠟冷卻凝固。

      4. 切片　將蠟塊固定于切片機，切成5μm厚的切片，在45℃的水面上展平后撈在涂有防脫劑的載玻片上，置60℃烤箱2h。

      5. 脫蠟　二甲苯脫蠟（Ⅰ、Ⅱ 各15min)，不同濃度酒精（100％、95％、80％、70％）置換二甲苯并經(jīng)蒸餾水水化后即可進(jìn)行染色。

      6. 蘇木精－伊紅染色　將經(jīng)處理的組織切片置蘇木素染液中染5min，自來(lái)水沖洗，稀鹽酸分化后，置流水中充分沖洗返藍；伊紅染液染色2～3min，流水沖洗干凈。

      7. 脫水、透明和封固　染好的切片經(jīng)梯度酒精脫水（70％、80％、95％、100％）各5min，二甲苯透明（Ⅰ、Ⅱ 各5 min)，在載玻片上加一滴中性樹(shù)膠，然后覆蓋一片清潔的蓋玻片。

      8. 顯微鏡觀(guān)察。

      1. 每取完一例標本后，所有的工具如刀、剪、盤(pán)、鑷、切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染。

      2. 盡量保持組織的原有形態(tài)，勿使組織塊受擠壓，切取標本的大小不超過(guò)2.0 cm×2.0 cm×0.2 cm。

      3． 依據組織塊大小確定脫水、透明和浸蠟時(shí)間。時(shí)間過(guò)長(cháng)，組織塊過(guò)硬、變脆；時(shí)間不夠，則組織塊硬度不夠，且HE染色時(shí)核漿藍染，界限不清，不利于觀(guān)察。

      4. 蘇木素染后應充分返藍，使細胞色彩鮮明，結構清晰。

      （本文轉載丁香通）