亚洲国产一级毛片视频-无码人妻久久一区二区三区-国产一级黄色毛片视频-精品中文字幕久久久久久-亚洲精品影院综合在线观看

新浪微博
微信互動(dòng)

免疫組織化學(xué)抗原修復

 免疫組織化學(xué)抗原修復

 
        由于石蠟切片標本多數使用甲醛固定,甲醛在組織中所形成的醛鍵、羧甲基等封閉了部分抗原決定簇,或由于蛋白分子之間的交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。因此在染色前有些抗原需要先進(jìn)行抗原修復或暴露才能使組織中的抗原抗體充分結合,出現理想的染色結果。至于哪種抗原需要進(jìn)行修復。需在建立染色程序時(shí)確定。常用的方法有加熱抗原修復法和酶消化法兩種。經(jīng)大量試驗驗證.加熱抗原修復法優(yōu)于酶消化法,其機制目前仍不清楚,可能是加熱打開(kāi)了組織抗原因甲醛固定所引起的抗原決定簇的交聯(lián),因此使免疫組織化學(xué)染色的敏感度大幅度提高。
 
    (1)加熱修復法:加熱修復法分為高壓加熱修復法和微波修復法兩種:


     ①高壓加熱修復法:取一定量枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0)于高壓鍋中,大火加熱直至沸騰。將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上,放人己沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋,扣緊壓力閥,繼續加熱至噴汽。從噴汽開(kāi)始計時(shí).1~2分鐘后,高壓鍋離開(kāi)熱源,冷卻至室溫(稍冷后,可在自來(lái)水籠頭下加速冷卻),取出玻片,先用蒸餾水沖洗2次,再用PBS沖洗2次,每次3分鐘。注意加熱時(shí)間長(cháng)短的控制很重要,從組織切片放人緩沖液到高壓鍋離開(kāi)火源的總時(shí)間控制在5―8分鐘為好.時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )使染色背景加深。緩沖液的量必須保證能浸泡到所有切片,用過(guò)的枸櫞酸緩沖液不能反復使用。


     ②微波修復法:取一定量pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液(緩沖液量不得小于500m1),于微波盒中,微波加熱直至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上。放人己沸騰的緩沖液中,中高檔微波繼續處理15―20分鐘,取出微波盒冷卻至室溫,從緩沖液中取出玻片。先用蒸餾水沖洗2次,之后用PBS沖洗2次,每次3分鐘。
 
    (2)胰蛋白酶消化修復法:主要用于細胞內抗原的顯示。使用0.1%氯化鈣液(pH7.8)制成0.1%胰蛋白酶液,37℃孵育切片15~30分鐘,之后用PBS洗滌3次,每次3分鐘。
 
    (3)胃蛋白酶消化修復方法:主要用于細胞間質(zhì)抗原的顯示。一般使用濃度為0.4%,消化時(shí)間為37℃,30~180分鐘。

上一篇:iPS細胞在治療血液疾病的應用
下一篇:肝臟的結構與肝炎、肝硬化和肝細胞癌的觀(guān)察
分享到: