獻給初學(xué)者：如何看流式細胞術(shù)結果中的圖？
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發(fā)布時(shí)間：2017-09-27
FCM 數據的存貯的方式是 FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊（List Mode）方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀(guān)性，數據的顯示通常有一維直方圖、二維點(diǎn)圖、等高線(xiàn)圖、密度圖等幾種。由數據還可以做出標準曲線(xiàn)進(jìn)行定量分析。
坐標軸的意義？
單參數直方圖
每一個(gè)細胞單參數的測量數據可以整理成統計分布，以直方圖的方式來(lái)顯示。在圖中，橫坐標表示熒光信號或散射光信號相對強度的值，其單位是道數（channel），可以是線(xiàn)形（line）或者對數（log）?？v坐標一般是相對細胞/粒子數（count）。
二維圖
在二維圖的中，橫坐標/縱坐標都表示熒光信號或散射光信號相對強度的值，可以是線(xiàn)形（line）或者對數（log）。雙參數圖可以將樣品細胞群分開(kāi)，從而方便對感興趣的細胞進(jìn)行分析。
「Gate」和 「Regin」？
設門(mén)是流式細胞分析中一種重要的技術(shù)，只有通過(guò)最佳的設門(mén)方式，才能準確地獲取和分析數據，從而得到臨床診斷和科研中有價(jià)值的信息。
On-line gating(threshold gating) 監測/獲取數據
Off-line gating： 分析實(shí)驗數據
散射光設門(mén)/熒光設門(mén)
散射光/熒光聯(lián)合設門(mén)
多重邏輯門(mén)（組合門(mén)）多重邏輯門(mén) G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)
其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2
流式圖中的顏色與熒光顏色？
流式圖中的顏色為區分不同細胞群而人為指定，與熒光顏色無(wú)關(guān)。
流式圖中的陰/陽(yáng)（N/P）如何劃分?
如何做 M1 陰性界限？實(shí)際上，這個(gè) M1 的劃分完全是根據陰性 （同型）對照來(lái)的。如下圖：左圖為同型對照，即：您所檢測的物質(zhì)在陰性組中的基礎表達量，可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎水平、未受刺激時(shí)等。右圖即陽(yáng)性組，也就是接受刺激后，功能狀態(tài)下、藥物作用后等。
陰性正好在 101 劃分？
其實(shí)，我們可以人為地將電壓，放大倍數調到相應的大小，使陰性的右邊界在某一個(gè)值上，（通常劃在 101 附近）這樣后期做 sample 時(shí)好看。當然也可以調到 102，103 次方。
為什么要進(jìn)行熒光補償？
流式細胞分析中經(jīng)常要用到 2 種以上的熒光標記抗體進(jìn)行染色，而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。
「熒光補償」這個(gè)術(shù)語(yǔ)是指修正熒光滲漏的過(guò)程，如從探測器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號。
（本文轉載：丁香通）
