細胞生物學(xué)家往往需要將外源分子送入細胞進(jìn)行研究,比如質(zhì)粒DNA或siRNA?;瘜W(xué)試劑、電穿孔和病毒遞送系統是目前最常用的三種途徑。
遞送方法的選擇主要取決于目標細胞的類(lèi)型,需要遞送的分子,以及研究所需的轉染效率?!叭藗冇玫米疃嗟氖亲詈?jiǎn)單的方法——化學(xué)轉染,”Mirus Bio公司的Josh Snow說(shuō)。
化學(xué)轉染試劑旨在減少細胞對核酸的排斥(二者都帶負電荷),促使細胞膜通過(guò)胞吞、胞飲或融合攝入外源物質(zhì)。對于容易培養和轉染的細胞系來(lái)說(shuō),傳統的化學(xué)和物理轉染(如電穿孔)就已經(jīng)足夠了。不過(guò)化學(xué)試劑往往對細胞有毒,轉染原代細胞、干細胞或者其他難轉染細胞的效率也比較低。雖然病毒遞送對許多細胞類(lèi)型的效率很高,但使用起來(lái)比較麻煩,還需要采取特殊的防護措施,對操作者的專(zhuān)業(yè)要求也比較高。
目前已經(jīng)有不少廠(chǎng)家注意到了上述問(wèn)題,開(kāi)始開(kāi)發(fā)更有效的細胞轉染產(chǎn)品。舉例來(lái)說(shuō),去年一月份Life Technologies發(fā)布的Lipofectamine 3000,該產(chǎn)品專(zhuān)門(mén)針對“難轉染細胞和原代細胞”,該公司的Xavier de Mollerat du Jeu說(shuō)。Mirus Bio公司也為那些難轉染的細胞類(lèi)型開(kāi)發(fā)了新轉染試劑,包括皮膚細胞、神經(jīng)細胞、乳腺癌細胞和血細胞。
除此之外,人們還在探索全新的轉染方法。The Scientist雜志的這篇文章,就對最新的一些轉染產(chǎn)品和方法進(jìn)行了詳細的介紹。
Exo-Fect是一種非脂質(zhì)體的轉染試劑,可將核酸(包括質(zhì)粒DNA、mRNA、microRNA和siRNA)直接送入事先分離到的胞外體exosome。胞外體是細胞分泌出來(lái)進(jìn)行通訊的小囊泡,能夠與其他細胞融合或者經(jīng)由內吞作用被細胞內化。轉染了外源核酸的胞外體,可以成為理想的運輸工具,System Biosciences公司的Travis Antes說(shuō)。
首先,用戶(hù)需要通過(guò)超速離心或者使用商業(yè)化的胞外體分離試劑盒來(lái)分離胞外體。System Biosciences、Life Technologies等公司都提供有這樣的產(chǎn)品。另外,研究者也可以直接從System Biosciences公司買(mǎi)到已經(jīng)分離好的胞外體。
這個(gè)轉染方案非常簡(jiǎn)單,用戶(hù)先將胞外體、核酸以及Exo-Fect試劑混合在一起,在37度下加熱10分鐘,然后在冰上冷卻半小時(shí)。之后可以用另一個(gè)試劑將胞外體沉淀下來(lái),將其與轉染試劑和未轉染的核酸分離。完成整個(gè)過(guò)程大約需要45分鐘,每個(gè)轉染反應需要約一百萬(wàn)胞外體(應該足以處理六孔板中兩個(gè)孔的細胞)。
優(yōu)勢:胞外體介導的遞送是無(wú)毒的,沒(méi)有引起細胞死亡。胞外體可以遞送不同類(lèi)型核酸的混合物。Exo-Fect轉染試劑盒中含有一個(gè)熒光標記的非靶向性siRNA,可以用來(lái)監控轉染和核酸遞送的效果。
挑戰:在某些情況下,胞外體的分離可能費時(shí)費力。這個(gè)產(chǎn)品是今年四月發(fā)布的,接受廣泛檢驗的時(shí)間還沒(méi)那么長(cháng)。細胞培養中常用的胎牛血清(FBS)含有大量的胞外體,會(huì )干擾胞外體介導的分子遞送。System Biosciences公司推薦用戶(hù)使用去除了胞外體的FBS。
成本:Exo-Fect試劑盒售價(jià)是10個(gè)轉染反應$195,20個(gè)反應$350。胞外體分離試劑盒$288起,50 mL去除了胞外體的FBS是$153。預先分離好的胞外體$350起,一個(gè)管大約含有一百萬(wàn)胞外體。
CellSqueeze是2013年上市的一個(gè)微流體系統,能夠將各種物質(zhì)(包括siRNA、藥物、蛋白或納米顆粒)送入幾乎任何細胞。這個(gè)矩形微流體芯片含有75個(gè)并行通道,每個(gè)通道直徑30微米,其中設計有小于細胞直徑的窄道。
當細胞擠過(guò)窄道時(shí),質(zhì)膜會(huì )暫時(shí)出現孔洞,允許細胞外的分子通過(guò)擴散進(jìn)入細胞質(zhì),之后細胞膜又會(huì )很快閉合。這種方式“看來(lái)并未對細胞產(chǎn)生任何長(cháng)期的副作用,”SQZ的創(chuàng )始人之一,哈佛醫學(xué)院的博后Armon Sharei說(shuō)。
Magna Nuclear RIP?Kit — 非編碼RNA(lncRNA、enhancer RNA 、miRNA等)與蛋白相互作用創(chuàng )新技